Определение общих колиформных бактерий методом мембранной фильтрации

Определение общих колиформных бактерий методом

мембранной фильтрации

Принцип метода заключается в использовании на этапе идентификации комбинации двух признаков ОКБ: первый (основной) - характер роста колоний на лактозной среде Эндо - темно-красные с отпечатком на обратной стороне фильтра, что подтверждает способность ферментировать лактозу до кислоты; второй - отрицательный оксидазный тест или способность к газообразованию. Поскольку лактозоположительные бактерии, ферментирующие лактозу до кислоты и газа, аналогично ферментируют глюкозу, то газообразование можно подтвердить на средах с любым углеводом, однако использование подтверждающих сред с глюкозой целесообразнее, т.к. сокращает время анализа на сутки.

Выполнение анализа

Подготовка посуды, питательных сред и реактивов, техника мембранной фильтрации выполняется по МУК 4.2.1018-01.

Объем пробы воды 300 мл профильтровывают через мембранные фильтры, помещают на среду Эндо. Чашки с посевами ставят в термостат дном вверх и инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение 24 +/- 2 часа.

Если после инкубации на фильтрах нет роста или выросли колонии, не характерные для колиформных бактерий - плесневые, морщинистые, пленчатые, губчатые, расплывчатые, прозрачные, - выдают отрицательный ответ.

Если на фильтрах обнаружен рост типичных для лактозоположительных бактерий колоний (выявляются благодаря дифференциальным свойствам лактозной среды Эндо) - темно-красных, красных с металлическим блеском или без него, слизистых розовых с отпечатком на обратной стороне фильтра - следует подтвердить их принадлежность к ОКБ. Для этой цели можно использовать один из вариантов.

Первый вариант

Выполняют оксидазный тест любым из методов (наложением мембранных фильтров на диск фильтровальной бумаги, смоченной реактивом, нанесением штрихом культуры на полоску фильтровальной бумаги, смоченной реактивом, накапыванием реактива на колонию и другими). При изменении цвета всех колоний (оксидазоположительные) дают отрицательный ответ.

Не изменившие цвета после контакта с реактивом типичные колонии подсчитывают и относят к группе ОКБ.

Второй вариант

Подсчитывают число типичных колоний каждого типа и подтверждают их способность образовывать кислоту и газ путем посева на полужидкую среду с глюкозой. Исследуют не менее 2 - 3 колоний каждого типа. Посевы инкубируют при температуре 37 °C. Просмотр реакции проводят через 4 - 6 часов и при наличии кислоты и газа дают положительный ответ. Пробирки, где образовалась только кислота или среда не изменилась, оставляют для окончательного учета через 24 часа.

К группе ОКБ относят бактерии, образующие типичные колонии на среде Эндо и кислоту и газ при ферментации глюкозы.

Допускается использование любых тест-систем для установления способности газообразования при ферментации углевода, имеющие сертификат качества.

Примечание. При производственном контроле наличие ОКБ служит основанием к приостановке выдачи сертификата качества на данную партию продукции. Дальнейшую идентификацию выросших розовых колоний можно не продолжать.