Определение глюкозоположительных колиформных бактерий методом мембранной фильтрации

Определение глюкозоположительных колиформных бактерий

методом мембранной фильтрации

В индикаторную группу ГКБ входят помимо ОКБ еще и лактозоотрицательные бактерии семейства Enterobacteriaceae, оксидазоотрицательные, растущие на среде Эндо в виде разного типа розовых колоний, ферментирующие глюкозу до кислоты и газа при температуре (37 +/- 1) °C.

Принцип метода определения ГКБ заключается в подтверждении наличия бактерий, ферментирующих глюкозу до кислоты и газа в том же посеве, что и для определения ОКБ. При обнаружении типичных и розовых (или только розовых) колоний подсчитывают ОКБ, а затем продолжают идентификацию розовых колоний по оксидазному тесту и способности образования кислоты и газа на подтверждающих средах с глюкозой.

Выполнение анализа

Если на фильтрах помимо типичных выросли колонии, характерные для лактозоотрицательных бактерий семейства Enterobacteriaceae, - розовые, розовые с красным центром, бледно-розовые, белесые (или только лактозоотрицательные), выполняют оксидазный тест путем помещения мембранного фильтра на кружок фильтровальной бумаги, обильно смоченный реактивом для оксидазного теста. При признаках проявления реакции, но не позднее чем 5 минут, фильтр переносят обратно на среду Эндо и учитывают результат после четкого проявления реакции.

Если все колонии изменили цвет (оксидазоположительные), дают отрицательный ответ.

При наличии колоний, не изменивших цвет (оксидазоотрицательных), подсчитывают число таких колоний каждого типа и производят пересев в полужидкие среды с глюкозой. Исследуют не менее 2 - 3 колоний каждого типа. Инкубируют посевы при 37 °C в течение 4 - 24 часов. В качестве ОКБ подсчитывают типичные колонии. В качестве ГКБ подсчитывают в сумме колонии как типичные, так и розовые, которые способны образовывать кислоту и газ при ферментации глюкозы.