4.4.2. Среда Финн-II

Среда Финн-II рекомендована в нашей стране как вторая стандартная среда для выделения микобактерий. Она отличается от среды Левенштейна-Йенсена тем, что вместо L-аспарагина в ней используется глутамат натрия и подбор солей рассчитан таким образом, что конечная кислотность среды (pH = 6,3 - 6,8) имеет более низкое значение и большую стабильность по сравнению со средой Левенштейна-Йенсена. Эти свойства обусловливают более высокую эффективность среды при засеве материала, обработанного щелочными детергентами.

Рост микобактерий появляется на этой среде на несколько дней раньше, чем на среде Левенштейна-Йенсена, а выделение культур на 6 - 8% выше.

Реактивы:

Магний сернокислый MgSO4 x 7H2O - ГОСТ 4523-77;

Натрий лимоннокислый C6H5O7Na3 x 5,5H2O - ГОСТ 22280-86;

Квасцы железоаммонийные Fe(NH4) x (SO4)2 x 12H2O - ГОСТ 4205-77;

Калий однозамещенный фосфорнокислый KH2PO4 - ТУ 6-09-5324-87;

Аммоний лимоннокислый однозамещенный C8H11O7N - ГОСТ 7234-79;

Натрий глутаминовокислый однозамещенный C5H8NNaO4 x H2O - ТУ 6-09-337-70;

Глицерин C3H8O3 - ГОСТ 6259-75;

Малахитовый зеленый - C52H54O12N4 - ТУ 6-09-1557-77;

Вода дистиллированная - ГОСТ 6709-77.

Состав среды:

Раствор минеральных солей:

Вышеперечисленные ингредиенты растворяют в дистиллированной воде в указанной последовательности при слабом подогревании (не доводя до кипения) на водяной бане. Кислотность не корригируют. Стерилизуют в автоклаве 30 минут при 1 атм. (121 °C). Срок хранения раствора составляет 3 - 4 недели при комнатной температуре.

Раствор малахитового зеленого:

Растворить в стерильной дистиллированной воде малахитовый зеленый, поместив раствор в термостат на 1 - 2 часа. Приготовленный раствор не подлежит длительному хранению и при появлении осадка или при изменении окраски его следует заменить свежим раствором. Стерилизовать при 1 атм. (121 °C) 30 мин.

Яичная масса.

Свежие диетические куриные яйца со сроком хранения не более 7 суток без трещин и дефектов скорлупы тщательно отмывают в теплой проточной воде с помощью ручных щеток и щелочного мыла, затем оставляют на 30 мин. в мыльном растворе. Тщательно промывают в проточной воде и погружают в 70% этиловый спирт на 30 мин. Затем в стерильном боксе разбивают яйца стерильным ножом в стерильную посуду, доводя общий объем яичной массы до 1 л (для этого требуется в среднем 20 - 25 яиц в зависимости от их величины). Тщательно взбивают стерильным венчиком или в стерильном миксере.

Приготовление среды.

В большую стерильную емкость, соблюдая правила стерильности, помещают следующие растворы:

Тщательно перемешивают и фильтруют через 4-слойный стерильный марлевый фильтр.

Добавляют 20 мл раствора малахитового зеленого, тщательно перемешивают, избегая образования пены, и в течение не более 15 минут разливают в пробирки приблизительно по 5 мл, следя за тем, чтобы в растворе не сформировался осадок.

Свертывание среды.

Для свертывания среды используются специальные аппараты-свертыватели типа "АСИС". Пробирки с разлитой в них средой помещают в специальные штативы с подобранным углом наклона для формирования косяка среды. Штативы устанавливают в свертыватель и проводят коагуляцию при 85 °C в течение 45 минут. Так как приготовление питательной среды проводится в условиях соблюдения стерильности, свертывание является не стерилизующей, а лишь коагулирующей процедурой.

Качество приготовленной яичной среды зависит от соблюдения температурного и временного режимов коагуляции. Обесцвечивание среды, наличие пузырьков или углублений на поверхности среды свидетельствует о нарушении режима свертывания. Повторное свертывание также ухудшает качество среды. Среды с нарушенным режимом свертывания подлежат удалению.

Проверка на стерильность.

После свертывания каждая вновь приготовленная партия среды подвергается контролю на стерильность. Для этого она помещается в термостат и выдерживается в нем 2 - 3 суток при 37 °C.

Хранение.

Приготовленная партия среды должна иметь дату изготовления и сохраняться в холодильнике при 4 °C с тщательно закрытыми пробками для предотвращения высыхания. Срок хранения среды не должен превышать 4 недель.