1.1. Определение фагоцитарной активности макрофагов
1.1. Определение фагоцитарной активности макрофагов.
Клетки перитонеального экссудата (КПЭ) выделяют асептически от
3 - 5 мышей опытной и контрольной групп и помещают в среду 199,
содержащую 5 МЕ гепарина в 1 мл, в пробирки, стоящие на льду. Не
используют экссудаты, содержащие эритроциты. После осаждения (150
g, 10 мин.) клетки ресуспендируют в среде 199 с 10% сыворотки
крупного рогатого скота с антибиотиками (100 ед./мл). Концентрацию
клеток доводят до 1,0 - 2,0 х 106 кл./мл и суспензию разливают по
2 мл в чашки Петри диаметром 40 мм. Чашки помещают в термостат при
температуре (37 +/- 2) °С с содержанием 5% СО Через 60 мин.
2
смывают неприлипшие клетки раствором Хенкса, добавляют 2 мл свежей
среды и оставляют на 18 - 24 ч в термостате с 5 - 7% СО при
2
температуре (37 +/- 2) °С.
Клетки для исследования фагоцитоза можно получать также на половинках покровных стекол, помещенных в пробирки с 1,5 - 2 мл КПЭ.
Объектом фагоцитоза могут служить эритроциты барана, дрожжеподобные грибы Candida albicans или лабораторный штамм Staphylococcus (N 9198) или любые другие микробные клетки.
Эритроциты барана (ЭБ) <*> трижды отмывают 0,9%-ным раствором хлорида натрия, осаждая на центрифуге при 800 g в течение 5 мин. Готовят 0,5%-ную взвесь ЭБ на среде 199.
--------------------------------
<*> Кровь барана, взятую в консервант крови, можно хранить до 10 сек. при 6 - 8 °С.
Суточные культуры живых или убитых прогреванием при
температуре (90 +/- 2) °С в течение 45 - 60 мин. микроорганизмов
отмывают путем центрифугирования не менее 3-х раз 0,9%-ным
раствором хлорида натрия, ресуспендируют в нем и определяют
концентрацию суспензии по стандарту оптической мутности. Взвесь
разводят средой 199 до концентрации, соответствующей
9
предварительно установленному соотношению (1,0 - 2,0 кл./мл).
В чашки Петри, содержащие КПЭ, наливают 1 мл свежей среды и вносят по 1 мл взвеси ЭБ или соответствующих микроорганизмов. Через 30 - 60 мин. чашки ополаскивают холодным раствором Хенкса, подсушивают и фиксируют 10 мин. метанолом. Окрашивают азур-эозином по Романовскому - Гимза.
Учет результатов. Просматривают не менее 200 клеток, подсчитывая фагоцитирующие клетки и количество содержащихся в них ЭБ или микробов.
Результаты выражают процентом фагоцитирующих клеток (ПФ) и фагоцитарным числом (ФЧ), которое определяется количеством частиц на один фагоцит.
- Гражданский кодекс (ГК РФ)
- Жилищный кодекс (ЖК РФ)
- Налоговый кодекс (НК РФ)
- Трудовой кодекс (ТК РФ)
- Уголовный кодекс (УК РФ)
- Бюджетный кодекс (БК РФ)
- Арбитражный процессуальный кодекс
- Конституция РФ
- Земельный кодекс (ЗК РФ)
- Лесной кодекс (ЛК РФ)
- Семейный кодекс (СК РФ)
- Уголовно-исполнительный кодекс
- Уголовно-процессуальный кодекс
- Производственный календарь на 2025 год
- МРОТ 2024
- ФЗ «О банкротстве»
- О защите прав потребителей (ЗОЗПП)
- Об исполнительном производстве
- О персональных данных
- О налогах на имущество физических лиц
- О средствах массовой информации
- Производственный календарь на 2024 год
- Федеральный закон "О полиции" N 3-ФЗ
- Расходы организации ПБУ 10/99
- Минимальный размер оплаты труда (МРОТ)
- Календарь бухгалтера на 2024 год
- Частичная мобилизация: обзор новостей