2.4.5. Определение сальмонелл

2.4.5. Определение сальмонелл.

Патогенные микроорганизмы, в том числе сальмонеллы, не должны обнаруживаться в той массе продукта, которая указана в табл. 1, 2, 3, 4.

2.4.5.1. Метод основан на использовании сред обогащения для увеличения роста сальмонелл, их выделения на специальных агаровых средах с последующим проведением серологических реакций.

2.4.5.2. Проведение анализа.

При исследовании стерилизованных жидких смесей и продуктов объем (масса) исследуемого продукта должен составлять (100 +/- 1,0) куб. см; для кисломолочных жидких продуктов (до нейтрализации) - (50 +/- 0,5) куб. см, кроме "Балдыргана" и заквасок, где объем (100 +/- 1,0) куб. см; пастообразные продукты, готовые каши, напитки исследуются в массе (объеме) (50 +/- 0,5) куб. см (г).

2.4.5.3. В стерильных условиях в стакан вместимостью 200 куб. см отмеривают (100,0 +/- 1,0) куб. см; (50 +/- 0,5) куб. см либо отвешивают (50 +/- 0,5) г исследуемого продукта и асептически переносят в колбы вместимостью соответственно 1000,0 куб. см, 400,0 куб. см или 250,0 куб. см, содержащие (400,0 +/- 1,0) куб. см, (200 +/- 1,0) куб. см жидкой среды обогащения, соблюдая соотношение 1:5 продукта и питательной среды. Все тщательно перемешивают. При плохом растворении продукта пробы подвергают механическому встряхиванию на аппарате для встряхивания жидкостей (шуттель-аппарат). В качестве сред обогащения могут применяться магниевая среда, среда Мюллера, Кауфмана, селенитовая среда (п. п. 4.2.4.1, 4.2.4.4, 4.2.4.5, 4.2.4.6).

Допускается посев жидких продуктов в разные объемы сред обогащения двойной концентрации (1:1).

Кисломолочные продукты перед внесением в среду обогащения нейтрализуют (п. 2.3.4).

Посевы выдерживают в термостате при (37 +/- 1) град. C в течение 18 - 24 часов.

2.4.5.4. На следующий день производят высев из сред обогащения на поверхность хорошо подсушенных чашек с дифференциально-диагностическими средами Плоскирева и висмут-сульфитного агара (п. 4.2.4.7). Для получения отдельных колоний петлей берут минимальное количество посевного материала и производят посев штрихом. Чашки с посевами помещают в термостат при (37 +/- 1) град. C на 24 - 48 часов. Проверку посевов осуществляют дважды: через (24 +/- 1) и (48 +/- 3) часа после выдерживания в термостате.

2.4.5.5. Обработка результатов.

2.4.5.5.1. На среде Плоскирева колонии сальмонелл бесцветные, плотные, на висмут-сульфитном агаре - черные, с характерным металлическим блеском, при этом наблюдается прокрашивание в черный цвет участка среды под колонией.

При отсутствии типичных колоний для сальмонелл на каждой из сред конечный результат анализа записывают как отрицательный, т.е. в исследуемой массе (объеме) продукта сальмонеллы отсутствуют.

При наличии на любой из питательных сред на чашках Петри типичных или подозрительных колоний на сальмонеллы производят их дальнейшее изучение.

2.4.5.6. Из каждой среды на чашках Петри, содержащей подозреваемую колонию сальмонелл, выбирают хорошо изолированную колонию и высевают штрихом и уколом на трехсахарный агар с мочевиной (п. 4.2.4.8) или среду Клиглера (п. 4.2.4.10). Пробирки с посевами выдерживают в термостате при (37 +/- 1) град. C в течение 24 часов. Производят идентификацию культур, высеянных на среду Клиглера или трехсахарный агар с мочевиной, по ферментации лактозы, глюкозы, сахарозы и расщеплению мочевины:

- покраснение или пожелтение скошенной части столбика среды указывает на образование кислоты в результате ферментации лактозы, сахарозы или обоих сахаров;

- покраснение самого столбика указывает на расцепление глюкозы;

- восстановление цвета среды до исходного (бледно-розовый) свидетельствует о расщеплении мочевины;

- почернение среды в столбике свидетельствует об образовании сероводорода.

Механизм действия среды Клиглера идентичен с трехсахарным агаром (за исключением мочевины, которая в данной среде отсутствует).

2.4.5.7. Трактовка результатов.

Если культуры сбраживают лактозу с образованием газа и расщепляют мочевину, они не принадлежат к бактериям рода сальмонелла.

Культуры, не ферментирующие лактозу и не расщепляющие мочевину, но ферментирующие глюкозу (с образованием или без образования газа), подвергаются дальнейшему изучению (культуры, ферментирующие глюкозу без образования газа, подозрительны как брюшнотифозные или дизентерийные; культуры, ферментирующие глюкозу с образованием газа, дающие в среде пузырьки и продуцирующие сероводород <*>, могут принадлежать к бактериям рода сальмонелла).

--------------------------------

<*> Среди бактерий рода сальмонелла встречается до 15% штаммов, не продуцирующих сероводород.

Если ни в одной из пробирок не обнаружено ни одной характерной для сальмонелл реакции, то результат считают отрицательным и дают заключение об отсутствии в исследуемой массе (объеме) продукта бактерий рода сальмонелла.

2.4.5.8. Если обе пробирки покажут типичную для сальмонелл окраску сред, проводят серологическое исследование. Для этой цели берут петлей небольшое количество культуры из пробирок с трехсахарным агаром или средой Клиглера, эмульгируют в капле физиологического раствора на предметном стекле. Добавляют каплю поливалентной сальмонеллезной О-сыворотки (п. 4.2.4.11) к раствору и осторожно покачивают предметное стекло, чтобы смешать жидкости.

Положительная реакция на сальмонеллы (агглютинация) наблюдается в течение 30 - 60 сек. Обязательна постановка отрицательной контрольной реакции (культура + физиологический раствор).

Если при проведении серологического исследования агглютинации не обнаруживается, конечный результат записывают как отрицательный. Любая агглютинация, которая появляется на стекле, говорит о вероятности присутствия сальмонелл.

2.4.5.9. При выделении культур грамотрицательных палочек, ферментирующих глюкозу с образованием или без образования газа, не ферментирующих лактозу и сахарозу, образующих или не образующих сероводород и обладающих четкой серологической характеристикой, считают, что в исследуемой массе (объеме) продукта присутствуют бактерии рода сальмонелла.