8.3. Методы исследования, применяемые в иммуносерологии

Выбор оптимального метода определения антигенов и антител зависит от соответствия собранной пробы целям и задачам исследования (сроки от начала заболевания, отсутствие гемолиза и липолиза пробы, контаминации посторонней микрофлорой) и требований к спектру исследований, которые могут быть выполнены в конкретной лаборатории.

Используют следующие методы исследования:

Реакция агглютинации - используют для подтверждения наличия инфекции, вызванной определенным бактериальным антигеном.

Непрямая (пассивная) гемагглютинация (РПГА) с латексными частицами или эритроцитами барана - используют для определения наличия антител к возбудителям кишечных инфекций, в модификации с использованием латексных частиц (диагностикумов) - для диагностики бактериальных менингитов, определения антигенов Candida, гонококков, гемофильной палочки.

Ингибиция гемагглютинации - модифицированная РПГА, используют для определения антител к вирусам краснухи, гриппа, парагриппа, респираторно-синцитиального.

Преципитация - реакция между растворимыми антигенами и антителами, используют метод диффузии в геле.

Радиальная иммунодиффузия - определение антигенов или антител в моноспецифической системе с чувствительностью 1 - 10 мг/л, используют для сравнения антигенов (чувствительность - несколько нанограмм/мл).

Электроиммунодиффузия - подобна радиальной, но миграция реагентов направляется электрическим полем, и ее чувствительность в 5 - 10 раз выше, чем в радиальной иммунодиффузии.

Быстрые методы определения антигена и антител (15 - 20 мин.) - основаны на использовании коллоидных, меченых золотом антител. Определяют антитела к ВИЧ и антиген хламидии трахоматис. Диагностику лихорадки Денге осуществляют с помощью иммунохроматографического определения сывороточных IgM и IgG.

Мечеными конъюгатами определяют и мониторируют ответ (выработка антител) на антигены вирусов (ВИЧ, ЦМВ, герпес симплекс, герпес зостер), Т. pallidum, В. burgdoferi.

Полимеразная цепная реакция (ПЦР) и различные модификации на ее основе (методы гибридизации ДНК и РНК) - основана на замене биологической амплификации (накопление клеток микроорганизма при культивировании in vitro) на ферментативную (энзиматическую) амплификацию специфических последовательностей нуклеиновых кислот возбудителя. Гибридизация нуклеиновых кислот возбудителя позволяет определять гены, ответственные за антибиотикорезистентность, наличие в биопробе медленно растущих и требующих особых условий культивирования микроорганизмов (например, легионеллы и микобактерии), тех, которые невозможно культивировать in vitro (возбудитель болезни Уиппла - Tropheryma whippelii и др.).