4.3.2. Проведение испытания

При наличии признаков роста на средах накопления (помутнение среды, изменение ее цвета) делают пересев петлей на чашки Петри со средой Эндо (п. 6.4.10.1). Посевы инкубируют при температуре (37 +/- 1) °C в течение (24 - 48 +/- 3) ч.

На среде Эндо бактерии семейства Enterobacteriaceae образуют колонии круглые, малиновые с металлическим блеском или без него, розовые, бесцветные, блестящие, выпуклые, диаметром 1 - 4 мм.

При окраске по Граму наблюдаются грамотрицательные неспорообразующие палочки.

При отсутствии роста на среде Эндо типичных для семейства Enterobacteriaceae колоний считают, что в образце нет представителей данного семейства.

Колонии, подозрительные по морфологии (каждую отдельно), пересевают петлей на одну из скошенных сред по п. 6.4.7. Посевы инкубируют при (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 3) ч. Культуры проверяют на чистоту.

Чистые культуры исследуют на наличие фермента цитохромоксидазы, для чего полоску фильтровальной бумаги смачивают реактивом на обнаружение цитохромоксидазы (п. 6.4.6) и наносят бактериологической петлей или стеклянной палочкой суточную чистую культуру исследуемых бактерий. Синее окрашивание, появляющееся через 2 - 5 мин., свидетельствует о положительной оксидазной реакции.

При отрицательной оксидазной реакции культуры пересевают петлей на среду для определения ферментации глюкозы по п. 6.4.10.2 (допускается использование О/F-теста) и в среду для определения способности восстанавливать нитраты в нитриты по п. 6.4.10.3.

В половину пробирок со средой для определения ферментации глюкозы вносят по 0,5 куб. см стерильного вазелинового масла. Посевы инкубируют при (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 3) ч. При наличии роста ферментацию глюкозы устанавливают по изменению цвета среды из красного в желтый в пробирках с маслом и без него.

При проведении О/F-теста посев производят уколом в два столбика со средой Хью-Лейфсена по п. 6.4.10.4, один из которых заливают 1 куб. см стерильного вазелинового масла. Посевы инкубируют при (37 +/- 1) °C в течение (24 +/- 3) ч. При положительной реакции происходит изменение цвета среды при культивировании как в аэробных, так и в анаэробных условиях.

О наличии нитритов в среде судят по появлению красного окрашивания при внесении в среду реактива Грисса (п. 6.4.5). Для чего к суточной исследуемой культуре на среде для определения наличия нитритов приливают 0,2 - 0,3 куб. см реактива Грисса, погружая пипетку до дна пробирки. Появление красного окрашивания свидетельствует о наличии нитритов.