Приложение

к Методике определения платы

за оказание услуги

по испытанию корма, полученного

из генно-инженерно-модернизированных

организмов, на безопасность в целях

его государственной регистрации,

предоставляемой федеральными

государственными бюджетными

учреждениями, находящимися

в ведении Федеральной службы

по ветеринарному

и фитосанитарному надзору

ТРУДОЕМКОСТЬ

РАБОТ ПРИ ИСПЫТАНИИ КОРМА, ПОЛУЧЕННОГО

ИЗ ГЕННО-ИНЖЕНЕРНО-МОДИФИЦИРОВАННЫХ ОРГАНИЗМОВ

Для проведения испытания корма, полученного из генно-инженерно-модифицированных организмов, на безопасность в целях его государственной регистрации необходимо выполнение следующих операций и исследований.

1. Группа экспертов выполняет экспертный анализ и оценку данных, характеризующих заявленные на регистрацию генно-инженерно-модифицированные организмы.

1.1. Оценка композиционной эквивалентности проводится на основании сведений о результатах сравнения химического состава генетически модифицированных организмов (ГМО) с химическим составом его традиционного аналога, представленных заявителем, по следующим параметрам:

содержание белка;

аминокислотный состав;

содержание жира;

жирнокислотный состав;

углеводный состав;

содержание витаминов;

содержание макро- и микроэлементов;

содержание биологически активных веществ;

содержание аллергенов;

содержание антропогенных и природных контаминантов (токсичных элементов, микотоксинов, пестицидов, радионуклидов, вредных примесей и др.);

содержание антинутриентов и других веществ, характерных для растительных организмов данного вида.

Перечень показателей может быть изменен в зависимости от свойств изучаемого растительного организма.

Трудоемкость работ: эксперт - 310 минут.

1.2. Анализ результатов токсикологических исследований проводится на основании сведений, представленных заявителем и включающих:

результаты оценки безопасности одного или нескольких белков, определяющих проявление заданных признаков у ГМО (молекулярная и биохимическая характеристика белка; наличие или отсутствие гомологии с токсинами белковой природы, а также с белками, обладающими фармакологической или иной биологической активностью; изучение стабильности белка при обработке, хранении, технологической переработке; влияние температуры и pH, возможные модификации и/или образование стабильных белковых фрагментов в результате различных воздействий; устойчивость белка к обработке протеолитическими ферментами в эксперименте in vitro; исследования острой пероральной токсичности белка в эксперименте на грызунах; и др.);

результаты оценки безопасности нативного продукта (данные 90-дневных исследований на грызунах, данные исследований на молодых быстро растущих животных (цыплятах-бройлерах, ягнятах и др.), - в случае, если такие исследования проводились;

результаты других токсикологических исследований.

Трудоемкость работ: эксперт - 1060 минут.

1.3. Анализ результатов аллергологических исследований проводится на основании сведений, представленных заявителем и включающих:

результаты оценки аллергенных свойств одного или нескольких белков, определяющих проявление заданных признаков у ГМО (сравнение с известными аллергенами с использованием баз данных, содержащих информацию о трехмерной структуре и функции известных аллергенов и родственных им белков); определение потенциальной аллергенности белка в иммунохимических исследованиях; определение устойчивости к воздействию протеолитических ферментов (пепсина);

результаты аллергологических исследований нативного продукта (сравнение набора аллергенов исследуемого ГМО с набором аллергенов его традиционного аналога и др.) - должны быть проведены в случае, если имеются данные об аллергенных свойствах организма-донора.

Трудоемкость работ: эксперт - 1060 минут.

1.4. Анализ результатов пострегистрационного мониторинга в стране-заявителе и других странах, осуществляемого с целью выявления незаданных эффектов генетической модификации, которые не могли быть обнаружены на стадии регистрационных исследований, проводится на основании сведений, представленных заявителем, и научных публикаций.

Трудоемкость работ: эксперт - 1580 минут.

2. Эксперты проводят оценку методов идентификации ГМО, направленную на подтверждение их адекватности инструментальной и методической базе, используемой в учреждениях Федеральной службы по ветеринарному и фитосанитарному надзору для контроля за обращением продуктов, содержащих ГМО.

Экспертная оценка методов обнаружения, идентификации и количественного определения ГМО в кормах и кормовых добавках проводится на основании сведений, представленных заявителем.

Оценке подлежат:

метод идентификации одного или нескольких трансформационных событий;

метод количественного определения одного или нескольких трансформационных событий;

протоколы проведения анализов;

описание праймеров;

стандартные образцы состава и свойств.

Трудоемкость работ: эксперт - 980 минут.

3. Ведущий и старший научные сотрудники, лаборант-исследователь под руководством эксперта проводят генетическую оценку генно-инженерно-модифицированных организмов.

Генетическая оценка ГМО включает проверку присутствия одной или нескольких синтетических генетических конструкций методом полимеразной цепной реакции (ПЦР).

Генетические исследования включают:

описание молекулярной структуры одной или нескольких синтетических генетических конструкций (нуклеотидная последовательность);

метод идентификации и количественного определения одного или нескольких трансформационных событий;

описание праймеров;

исследование стандартных образцов состава и свойств.

Трудоемкость работ: эксперт - 130 минут; ведущий научный сотрудник - 550 минут; старший научный сотрудник - 870 минут; лаборант-исследователь - 410 минут.

4. Научный сотрудник и лаборант-исследователь проводят оценку функционально-технологических свойств генно-инженерно-модифицированных организмов. Изучаемые функциональные свойства:

pH водной суспензии;

растворимость;

реологические свойства водных дисперсий;

водоудерживающая и жироудерживающая способность;

критическая концентрация гелеобразования;

эмульсионная стабильность и др.

Трудоемкость работ: научный сотрудник - 360 минут; лаборант-исследователь - 370 минут.

5. Ведущий, старший научные сотрудники, научные сотрудники, лаборант-исследователь и рабочий по уходу за животными под руководством эксперта проводят оценку безопасности генно-инженерно-модифицированных организмов.

Перечень показателей безопасности определяется на основании требований СанПиН 2.3.2.1078-01 "Гигиенические требования безопасности и пищевой ценности пищевых продуктов", введенными в действие Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 14 ноября 2001 г. N 36, зарегистрированным Минюстом России 22 сентября 2002 г., регистрационный N 3326 <*>.

--------------------------------

<*> В редакции дополнений N N 1, 2, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14, 15, 16, 17, 18, 19, 21, 22, 23, 24, 25, утвержденных Постановлениями Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 20 августа 2002 г. N 27 (зарегистрировано Минюстом России 05.09.2002, регистрационный N 3775), от 15 апреля 2003 г. N 41 (зарегистрировано Минюстом России 29.05.2003, регистрационный N 4603), от 25 июня 2007 г. N 42 (зарегистрировано Минюстом России 16.07.2007, регистрационный N 9852), от 18 февраля 2008 г. N 13 (зарегистрировано Минюстом России 11.03.2008, регистрационный N 11311), от 5 марта 2008 г. N 17 (зарегистрировано Минюстом России 03.04.2008, регистрационный N 11465), от 21 апреля 2008 г. N 26 (зарегистрировано Минюстом России 23.05.2005, регистрационный N 11741), от 23 мая 2008 г. N 30 (зарегистрировано Минюстом России 06.06.2008, регистрационный N 11805), 16 июля 2008 г. N 43 (зарегистрировано Минюстом России 31.07.2008, регистрационный N 12059), от 1 октября 2008 г. N 56 (зарегистрировано Минюстом России 02.10.2008, регистрационный N 12391), от 10 октября 2008 г. N 58 (зарегистрировано Минюстом России 27.10.2008, регистрационный N 12530), от 11 декабря 2008 г. N 69 (зарегистрировано Минюстом России 19.12.2008, регистрационный N 12906), от 5 мая 2009 г. N 28 (зарегистрировано Минюстом России 29.06.2009, регистрационный N 14168), от 8 декабря 2009 г. N 73 (зарегистрировано Минюстом России 24.12.2009, регистрационный N 15813), от 27 января 2010 г. N 6 (зарегистрирован Минюстом России 10.03.2010, регистрационный N 16592), от 21 апреля 2010 г. N 27 (в ред. от 05.10.2010) (зарегистрировано Минюстом России 04.05.2010, регистрационный N 17097), от 28 июня 2010 г. N 71 (зарегистрирован Минюстом России 09.08.2010, регистрационный N 18097), от 10 августа 2010 г. N 102 (зарегистрировано Минюстом России 08.09.2010, регистрационный N 18381), от 12 ноября 2010 г. N 145 (зарегистрирован Минюстом России 21.12.2010, регистрационный N 19298), от 27 декабря 2010 г. N 177 (зарегистрирован Минюстом России 17.02.2011, регистрационный N 19879), от 11 апреля 2011 г. N 30 (зарегистрирован Минюстом России 13.05.2011, регистрационный N 20739), от 1 июня 2011 г. N 79 (зарегистрирован Минюстом России 19.07.2011, регистрационный N 21407), от 6 июля 2011 г. N 90 (зарегистрирован Минюстом России 15.12.2011, регистрационный N 22636); Постановлением Главного государственного санитарного врача Российской Федерации от 31 мая 2002 г. N 18 (зарегистрировано Минюстом России 04.06.2002, регистрационный N 3499).

Изучаемые показатели:

содержание токсичных элементов;

содержание микотоксинов;

содержание пестицидов;

содержание радионуклидов;

содержание вредных примесей;

микробиологические показатели;

другие показатели (в случае необходимости).

Трудоемкость работ: эксперт - 20 минут; ведущий научный сотрудник - 510 минут; старший научный сотрудник - 870 минут; научный сотрудник - 780 минут; лаборант-исследователь - 440 минут.

6. Токсикологические исследования ГМО проводятся ведущим, старшим научными сотрудниками, научными сотрудниками, лаборантом-исследователем и рабочим по уходу за животными под руководством эксперта в эксперименте на лабораторных животных. Продолжительность эксперимента 180 дней.

Трудоемкость работ эксперта по п. 6 - 240 минут.

Исследуются следующие показатели:

6.1. Интегральные показатели:

общее состояние животных (внешний вид, двигательная активность, состояние шерстного покрова) - каждые 2 дня;

поедаемость корма - ежедневно;

масса тела - каждые 7 дней;

масса внутренних органов (головной мозг, сердце, селезенка, легкие, тимус, гипофиз, печень, почки, надпочечники, семенники) - на 30-й и 180-й дни эксперимента.

Трудоемкость работ: научный сотрудник - 340 минут; лаборант-исследователь - 465 минут.

6.2. Гематологические, биохимические, морфологические исследования проводят на 30-й и 180-й дни эксперимента.

Изучаемые показатели:

концентрация гемоглобина;

гематокрит;

общее количество эритроцитов;

средний объем эритроцита (СОЭ);

среднее содержание гемоглобина в эритроците (ССЭ);

средняя концентрация гемоглобина в эритроците (СКЭ);

общее количество тромбоцитов;

общее количество лейкоцитов;

дифференцированный подсчет лейкоцитов (нейтрофилы, лимфоциты, эозинофилы, моноциты, базофилы).

Трудоемкость работ: научный сотрудник - 310 минут; лаборант-исследователь - 460 минут.

6.3. Биохимические показатели исследуются на 30-й и 180-й дни эксперимента, в том числе:

6.3.1. Общий биохимический анализ крови. Изучаемые показатели:

аланинаминотрансфераза (АЛТ);

аспартатаминотрансфераза (АСТ);

желчные кислоты;

фосфатаза щелочная;

билирубин общий;

билирубин прямой;

белок общий;

альбумин;

глобулин;

креатинин;

глюкоза;

альфа-амилаза;

липаза;

лактатдегидрогеназа;

общие липиды;

триглицериды;

холестерин;

холинэстераза;

мочевина;

хлориды;

натрий;

фосфор;

калий.

Трудоемкость работ: научный сотрудник - 420 минут; лаборант-исследователь - 460 минут.

6.3.2. Общий анализ мочи. Изучаемые показатели:

суточный диурез;

цвет и прозрачность;

относительная плотность;

pH;

белок;

глюкоза;

креатинин.

Трудоемкость работ: научный сотрудник - 210 минут; лаборант-исследователь - 460 минут.

6.3.3. Системные биомаркеры, в том числе:

6.3.3.1. Исследование системы антиоксидантной защиты (активность ферментов антиоксидантной защиты). Изучаемые показатели:

глутатионредуктаза;

глутатионпероксидаза;

супероксиддисмутаза;

каталаза.

Трудоемкость работ: старший научный сотрудник - 270 минут; научный сотрудник - 420 минут.

6.3.3.2. Содержание продуктов перекисного окисления липидов. Изучаемые показатели:

малоновый диальдегид.

Трудоемкость работ: научный сотрудник - 140 минут; лаборант-исследователь - 145 минут.

6.3.3.3. Исследование активности ферментов 1-й и 2-й фазы метаболизма ксенобиотиков. Изучаемые показатели:

общее содержание цитохрома P-450;

7-этоксирезоруфин-О-деэтилаза;

7-пентоксирезоруфин-О-деэтилаза;

UDP-глюкуронозилтрансфераза;

глутатионтрансфераза.

Трудоемкость работ: ведущий научный сотрудник - 240 минут; старший научный сотрудник - 340 минут; научный сотрудник - 640 минут; лаборант-исследователь - 370 минут.

6.3.3.4. Исследование системы регуляции апоптоза (общая и неседиментируемая активность ферментов лизосом). Изучаемые показатели:

галактозидаза;

глюкуронидаза;

арилсульфатазы A и B.

Трудоемкость работ: старший научный сотрудник - 570 минут; научный сотрудник - 710 минут; лаборант-исследователь - 280 минут.

6.4. Морфологические исследования. Объектом исследования служат:

кожа;

головной мозг;

сердце;

аорта;

селезенка;

легкие;

лимфатические узлы;

тимус;

щитовидная железа;

гипофиз;

ЖКТ (желудок, тонкая и толстая кишки);

печень;

поджелудочная железа;

почки;

семенники.

На 30-й и 180-й дни эксперимента (плановый забор):

макроскопические исследования;

микроскопические исследования - обзорные гистологические исследования;

морфометрический анализ.

Вскрытие погибших в течение эксперимента животных (внеплановый забор):

макроскопические исследования;

микроскопические исследования (перечень исследуемых органов может быть сокращен до минимально необходимого для установления причины смерти) - обзорные гистологические исследования.

Трудоемкость работ: старший научный сотрудник - 335 минут; научный сотрудник - 810 минут; лаборант-исследователь - 520 минут.

7. Ведущий, старший научные сотрудники, научные сотрудники, лаборант-исследователь и рабочий по уходу за животными под руководством эксперта проводят иммунологические исследования ГМО в эксперименте на мышах, включая изучение его иммуномодулирующих и сенсибилизирующих свойств по четырем тестам:

действие на гуморальное звено иммунитета - в тесте определения уровня гемагглютининов к эритроцитам барана;

действие на клеточное звено иммунитета - в реакции гиперчувствительности замедленного типа (ГЗТ) к эритроцитам барана;

действие как сенсибилизирующего агента - в тесте чувствительности к гистамину;

действие на естественную резистентность мышей к Salmonella typhimurium (сальмонеллы мышиного тифа).

Исследуемые показатели:

действие ГМО на гуморальное звено иммунитета;

действие ГМО на клеточное звено иммунитета;

действие ГМО как сенсибилизирующего агента к гистамину;

действие ГМО на естественную резистентность мышей к S. typhimurium.

Трудоемкость работ: эксперт - 215 минут; ведущий научный сотрудник - 610 минут; старший научный сотрудник - 670 минут; научный сотрудник - 720 минут; лаборант-исследователь - 490 минут.

8. Ведущий научный сотрудник, научные сотрудники, лаборант-исследователь и рабочий по уходу за животными под руководством эксперта проводят аллергологические исследования ГМО в течение 35 суток. Исследуемые показатели:

тяжесть протекания системной анафилаксии;

уровень циркулирующих сенсибилизирующих антител (субклассов IgG1 + IgG4) у крыс.

Трудоемкость работ: эксперт - 80 минут; ведущий научный сотрудник - 350 минут; научный сотрудник - 590 минут; лаборант-исследователь - 350 минут.

9. Ведущий, старший научные сотрудники, научные сотрудники, лаборант-исследователь и рабочий по уходу за животными под руководством эксперта проводят генотоксикологические исследования ГМО в эксперименте на лабораторных животных. Исследуемые показатели:

мутагенной активности (регистрация видимых структурных нарушений хромосом в клетках костного мозга на стадии метафазы);

регистрация повреждений ДНК.

Трудоемкость работ: эксперт - 130 минут; ведущий научный сотрудник - 550 минут; старший научный сотрудник - 870 минут; научный сотрудник - 720 минут; лаборант-исследователь - 440 минут.

10. Старший научный сотрудник, научные сотрудники, лаборант-исследователь и рабочий по уходу за животными под руководством эксперта проводят исследования репродуктивной токсичности ГМО в эксперименте на лабораторных животных, включая:

изучение влияния на генеративную функцию;

изучение эмбриотоксического и тератогенного действий, регистрируемых в пренатальном и постнатальном периодах развития.

Показатели, характеризующие генеративную функцию:

морфологические исследования семенников (индекс сперматогенеза, среднее количество нормальных сперматогоний в каждом канальце, относительное количество канальцев с 12-й стадией мейоза);

морфологические исследования яичников (примордиальные фолликулы, фолликулы с двумя и более слоями фолликулярных клеток, третичные фолликулы, атретические тела, желтые тела, общее количество генеративных форм).

Показатели, характеризующие перинатальное развитие потомства:

визуальное исследование матки, плаценты, плодов: выявление живых и мертвых плодов, подсчет количества желтых тел, мест имплантации, количество резорбций по правому и левому рогу матки (с последующим вычислением пред- и постимплантационной эмбриональной смертности);

анализ эмбрионального материала (не менее 5-ти плодов от каждой крысы).

Показатели, характеризующие постнатальное развитие потомства:

учет величины помета в день родов, подсчет количества живых и мертвых крысят, подсчет особей разного пола, установление внешних уродств, измерение массы тела, определение краниокаудального размера в 1-й день жизни;

учет показателей физиологического развития крысят: срок отлипания ушных раковин, появление первичного волосяного покрова, прорезывание резцов, открытие глаз, опускание семенников, открытие влагалища; выживаемость потомства в 1 - 30 дни жизни;

измерение массы тела и роста крысят в 1, 4, 7, 14, 21 и 25 дни жизни.

Трудоемкость работ: эксперт - 20 минут; старший научный сотрудник - 240 минут; научный сотрудник - 390 минут; лаборант-исследователь - 490 минут.

11. Подготовка экспертами отчета по результатам исследований ГМО.

Трудоемкость работ: эксперт - 390 минут.

12. Затраты времени рабочего по уходу за животными на содержание животных, находящихся под опытом, определяется общим временем проведения эксперимента - 180 суток. Затраты времени в сутки - 45 минут. В последний день эксперимента рабочий по уходу за животными тратит дополнительно 120 минут на утилизацию трупов животных.

Итого трудоемкость работ по услуге:

эксперт - 6215 минут;

ведущий научный сотрудник - 2810 минут;

старший научный сотрудник - 5035 минут;

научный сотрудник - 7560 минут;

лаборант-исследователь - 6150 минут;

рабочий по уходу за животными - 8220 минут.