Проникающая способность

допустимость использования иных полностью валидированных клеточных линий (например, MDCKII, LLC-PK1) вместо клеточной линии Caco-2, для получения оценки проникающей способности действующего вещества по БКС

проникающую способность действующего вещества принципиально можно оценить с помощью других методов in vitro (иные клеточные линии, например, MDCKII), in situ (Loc-I-Gut) или ex vivo (модель вывернутого мешка, сформированного из кишечника крысы). Поскольку опыт оценки проникающей способности действующих веществ с помощью in vitro подходов незначительный, необходимо применять метод, для которого накоплен наибольший опыт применения, которым является клеточная линия Caco-2. По мере накопления экспериментальных данных в отношении иных методов ex vivo и in situ на основе клеточных линий или животных, эти данные допускается использовать в последующем при наличии строгой валидации и стандартизации в соответствии с принципами, изложенными в приложении N 1 к Требованиям.

причины классификации действующих веществ, проявляющих умеренную проникающую способность (50 - 84%) в валидированных исследованиях на клеточной линии Caco-2 и являющихся нестабильными в желудочно-кишечном тракте, в группу действующих веществ, имеющих плохую проникающую способность

только действующим веществам с хорошей проникающей способностью присваивается класс I по БКС (что обеспечивает дополнительную гибкость для производителя при изменении состава вспомогательных веществ и дает возможность применения более широких критериев для растворения ( 85% в течение 30 минут)).

Отнесение к данному классу действующих веществ с проникающей способностью, отличной от хорошей проникающей способности (то есть веществ с умеренной или плохой проникающей способностью), не допускается в контексте биовейвера, основанного на биофармацевтической системе классификации. В отношении действующих веществ, не стабильных в желудочно-кишечном тракте, невозможно подтвердить хорошую проникающую способность in vivo. В случаях, когда хорошую проникающую способность невозможно подтвердить однозначно с помощью одного из методов, описанных в Требованиях, применение биовейвера, основанного на БКС, возможно если действующее вещество отвечает критериям класса III по БКС (лекарственный препарат имеет ограничения в отношении изменений состава и содержания вспомогательных веществ и является очень быстро растворимым (происходит высвобождение 85% действующего вещества в течение 15 минут)).

обеспечение размера выборки, необходимого для получения надежной оценки проникающей способности действующего вещества

планируемое количество повторов исследований, необходимое для правильного определения класса проникающей способности действующего вещества, трудно однозначно определить, поскольку оно зависит от вариабельности каждого отдельного анализа. Для этой группы анализов характерна высокая межлабораторная вариабельность, для которой в научной медицинской и химико-фармацевтической литературе (J Pharm Sci (97), 2008; Eur J Pharm&Biopharm (114), 2017)) установлены потенциальные источники вариабельности. Межлабораторная вариабельность существенно ниже в случае принадлежности действующего вещества к классу I по сравнению с классом III по БКС. В отношении действующих веществ с см/с имеются данные об умеренной вариабельности (5 - 20%), представленные в научной медицинской и химико-фармацевтической литературе Eur J Pharm Sci (56), 2014; J Pharmcol & Toxicol Methods (70), 2014. В связи с этим маловероятно, что высокая вариабельность приведет к неправильной оценке хорошей проникающей способности действующего вещества. Для анализов с использованием монослоев эпителиальных клеток линии Caco-2 минимально обоснованным является выполнение 3 повторов исследований.

подходы к статистической дифференцировке полученных значений Р_каж для лекарственных препаратов с плохой, умеренной и хорошей проникающей способностью в случае, если значения Р_каж накладываются друг на друга при сравнении отдельных значений для лекарственных препаратов из каждой группы

целью статистической дифференцировки экспериментальных значений является получение дихотомичного результата (действующее вещество проявляет или не проявляет хорошую проникающую способность). In vivo-проникающая способность референтных действующих веществ, перечисленных в приложении N 1 к Требованиям, подтверждена в исследованиях с участием человека, которые показывают, что средние значения проникающей способности этих действующих веществ четко позволяют их разделить на вещества с плохой, умеренной и хорошей проникающей способностью. Экспериментальные системы на основе линии клеток Caco-2 позволяют провести их валидацию для целей определения класса исследуемого действующего вещества по БКС, используя указанные референтные действующие вещества. Для успешной валидации необходимо получить дифференцированные результаты с использованием действующих веществ с хорошей, умеренной и плохой проникающей способностью in vitro.

Если средние значения для действующих веществ с плохой, умеренной и хорошей проникающей способностью накладываются друг на друга при экспериментальном определении, то это указывает на вероятные проблемы постановки или выполнения методики исследования с использованием клеточной линии Caco-2 в организации. Для подтверждения класса проникающей способности исследуемого действующего вещества анализ стандартизуется по указанным референтным действующим веществам. Исследуемое действующее вещество классифицируют как вещество с хорошей проникающей способностью, если его кажущаяся проникающая способность (Р_каж) равна или превышает такую способность у референтного действующего вещества с хорошей проникающей способностью. В этом случае дальнейшей статистической дифференцировки результатов проводить не требуется.