Стабильность

36. Чтобы удостовериться, что каждый этап пробоподготовки и последующего анализа образцов, а также условия их хранения не повлияли на постоянство сохранения концентрации анализируемого вещества, проводят исследование стабильности.

37. Стабильность необходимо оценить для каждого этапа аналитической методики, то есть получить доказательства того, что условия, для которых проведены исследования стабильности (например, вид биологического образца, наличие антикоагулянта, материал контейнера (упаковки), хранение и условия анализа) аналогичны реальным условиям анализа испытуемых образцов. Ссылка на литературные источники не является достаточным условием.

38. Стабильность анализируемого вещества в исследуемом образце оценивают, используя образцы нижнего и верхнего уровня концентрации для КК, которые исследуют сразу после их пробоподготовки и после хранения в условиях, в которых проводится работа с испытуемыми образцами. Образцы для КК, как правило, анализируют по градуировочной кривой, рассчитанной по свежеприготовленным градуировочным растворам. Полученные концентрации сравнивают с номинальными. Правильность для каждой из концентраций (для средних значений) должна находиться в пределах 15% от номинального значения.

39. Необходимо, учитывая линейный диапазон и диапазон определения детектора, испытать стабильность исходных и рабочих растворов после соответствующих разведений.

40. Исследования стабильности необходимо проводить при различных условиях хранения (например, используя подход "наихудшего случая"), по срокам, равным или превышающим сроки хранения фактических анализируемых исследуемых образов.

41. Необходимо провести следующие испытания стабильности:

а) стабильность исходных и рабочих растворов анализируемого вещества и ВС;

б) стабильность замороженного и размороженного биологического образца, содержащего анализируемое вещество (перемещенного из условий заморозки в комнатную температуру или температуру условий пробоподготовки не менее чем в 3 циклах "замораживания - размораживания");

в) краткосрочная стабильность анализируемого вещества в биологическом образце при комнатной температуре или температуре условий пробоподготовки;

г) естественное хранение биологического образца, содержащего анализируемое вещество (в замороженном виде).

42. Кроме того, необходимо провести следующие испытания (если применимо):

а) стабильность образца после пробоподготовки при комнатной температуре или в условиях хранения, которые будут использоваться во время анализа;

б) стабильность подвергшихся пробоподготовке образцов в устройстве для автоматического ввода пробы при температуре инжектора или автодозатора.

43. Изучение стабильности при замораживании и размораживании. Образцы для КК хранят замороженными в морозильной камере при предусмотренной температуре и затем размораживают при комнатной температуре или температуре пробоподготовки. После полного размораживания образцы заново замораживают в тех же условиях. В каждом цикле образцы должны находиться в замороженном состоянии в течение по меньшей мере 12 часов. Количество циклов изучения стабильности "замораживания - размораживания" должно быть равным или превышать количество таких циклов для испытуемых образцов.

44. Изучение естественного хранения замороженного биологического образца, содержащего анализируемое вещество. Образцы для КК необходимо заморозить в тех же условиях и хранить в таких условиях столько же, сколько и испытуемые образцы, или дольше. В отношении низкомолекулярных органических соединений допускается использовать подход, основанный на исследовании крайних вариантов (метод брекетинга), например, если стабильность подтверждена при температурах минус 70 и минус 20 °C, исследовать стабильность при температурах, попадающих в этот диапазон, не требуется. Стабильность крупных молекул (например, пептидов и белков) необходимо подтвердить для каждой из температур, при которых будет осуществляться хранение биологических образцов. В дополнение к образцам для КК допускается использовать испытуемые образцы, однако использование только испытуемых образцов является недостаточным, поскольку номинальные концентрации анализируемого вещества в них неизвестны. Результаты изучения стабильности при естественных условиях хранения должны быть получены до составления отчета.

45. Изучение стабильности исходных и рабочих растворов. Подтверждать стабильность рабочих растворов для каждой концентрации не требуется, допускается ограничиться подтверждением стабильности крайних вариантов (методом брекетинга). Подтверждать стабильность внутренних стандартов, меченных стабильными изотопами, не требуется, если подтверждено, что в условиях, для которых подтверждена стабильность анализируемого вещества, не происходит реакций изотопного обмена.

46. В отношении исследования с несколькими анализируемыми веществами, включая отдельные исследования биоэквивалентности, необходимо подтвердить стабильность каждого анализируемого вещества в биологическом образце, содержащем все анализируемые вещества.

47. В целях подтверждения того, что определяемые аналитической методикой концентрации анализируемого вещества отражают его истинное содержание в биологических образцах субъекта исследования в момент их отбора, необходимо изучить стабильность анализируемого вещества в биологическом образце, полученном сразу после отбора образцов и в течение последующей пробоподготовки вплоть до помещения его в условия хранения. Необходимость подтверждения такой стабильности следует рассматривать в частном порядке, ориентируясь на химическую структуру анализируемого вещества.