Градуировочная кривая (линейность)

15. Необходимо оценить функцию отклика градуировочной кривой для всех концентраций анализируемого вещества, при этом изучению подлежит определенный диапазон концентраций. Градуировочные стандартные образцы готовят путем добавления анализируемого вещества с известными концентрациями к холостой пробе с использованием той же ее разновидности, которая будет получена в исследовании. Каждому анализируемому веществу, изучаемому при валидации биоаналитической методики, и каждому аналитическому циклу должна соответствовать отдельная градуировочная кривая.

В идеале до начала проведения валидации биоаналитической методики необходимо установить ожидаемый диапазон концентраций. Этот диапазон должен перекрываться аналитической областью применяемой методики, задаваемой НПКО как наименьшего градуировочного стандарта и верхним пределом количественного определения (ВПКО) как наибольшего градуировочного стандарта. Диапазон необходимо задать с целью надлежащего описания фармакокинетики изучаемого анализируемого вещества.

16. Помимо холостого образца (подвергнутого обработке биологического образца, не содержащего анализируемого вещества или ВС) и нулевых образцов (подвергнутых обработке биологических образцов, содержащих ВС) необходимо использовать не менее 6 различных градуировочных концентраций. Каждый градуировочный стандарт допускается анализировать повторно.

17. Необходимо использовать зависимость, которая просто и надежно позволяет описать функцию отклика аналитического сигнала от концентрации анализируемого вещества. При вычислении параметров градуировочной кривой холостые и нулевые образцы не учитывают.

18. В отчете необходимо описать параметры градуировочной кривой (для линейной регрессии - угол наклона и свободный член (при необходимости последнего)). В дополнение к этому наряду с рассчитанными средними значениями правильности необходимо представить экспериментально рассчитанные концентрации градуировочных стандартов. В отчете необходимо представить все имеющиеся или приемлемые кривые (но не менее 3), полученные в ходе валидации.

19. Экспериментально рассчитанные концентрации градуировочных стандартов должны лежать в пределах 15% от номинальных значений (за исключением НПКО, для которых эти значения могут находиться в пределах 20%). Этому критерию должны соответствовать не менее 75% градуировочных стандартов в не менее чем 6 различных концентрациях. Если используются повторности, этим критериям (в пределах 15% или 20% для НПКО) должны соответствовать не менее 50% испытанных образцов для каждой концентрации градуировочных стандартов. Если градуировочный стандарт не соответствует этим критериям, его необходимо исключить, а градуировочную кривую пересчитать без учета этого стандарта (в том числе провести повторный регрессионный анализ). Если все повторности градуировочных стандартов НПКО или ВПКО были забракованы, то валидацию соответствующей серии градуировочных растворов не проводят. При этом необходимо установить причины забраковки, а методику при необходимости доработать. Если валидация следующей серии также не проходит, то до начала новой валидации необходимо пересмотреть методику.

20. Несмотря на то, что градуировочную кривую желательно строить с использованием свежеприготовленных образцов, при наличии надлежащих данных по стабильности допускается использовать ранее приготовленные и подвергшиеся хранению градуировочные образцы.