Приложение N 1

к главе 4 Правил

проведения исследований

биологических лекарственных средств

Евразийского экономического союза

УКАЗАНИЯ

ПО СТАТИСТИЧЕСКОЙ ОЦЕНКЕ ВИРУСНЫХ ТИТРОВ И ФАКТОРОВ

СНИЖЕНИЯ ИХ СОДЕРЖАНИЯ, А ТАКЖЕ ОЦЕНКЕ ИХ ВАЛИДНОСТИ

1. Титрование вирусов подвержено вариации, что характерно для всех биологических систем количественного определения. Необходимо обеспечить правильность оценки вирусных титров и факторов снижения, полученных на их основе, а также валидность методик, чтобы определить надежность исследования. Цель статистической оценки заключается в установлении того, что исследование проведено на приемлемом уровне вирусологической компетентности.

2. Методы количественного определения могут быть квантовыми и количественными. К квантовым методам относятся методики определения инфекционности у животных и методики определения инфекционной дозы для тканевой культуры (TCID), в которых определяется число инфицированных и неинфицированных животных или клеточных культур. Титр инфекционности определяют как долю инфицированных животных или культур. В количественных методах измеренная инфекционность непрерывно варьирует в зависимости от количества введенного вируса. К количественным методам относятся методики бляшкообразования, в которых каждая бляшка соответствует одной инфекционной единице. Как квантовые, так и количественные методики подлежат статистической оценке.

3. Вариабельность методики может быть обусловлена ошибками разведения, статистическими эффектами и различиями в системе, которые неизвестны либо сложно поддаются контролю. Эти эффекты, будут более выражены при сравнении различных аналитических циклов (вариабельность между аналитическими циклами), чем при сравнении результатов одного аналитического цикла между собой (вариабельность внутри цикла).

4. 95% доверительные границы вариабельности внутри цикла и между циклами должны быть 0,5 lg или меньше. Вариабельность между аналитическими циклами следует контролировать путем включения собственного стандартного препарата, оценка активности которого должна находиться приблизительно в пределах 0,5 lg от средней оценки, установленной в лаборатории в качестве приемлемой для применяемой методики. Вариабельность внутри цикла можно определять с помощью стандартных методов, описанных в руководствах по аналитическим исследованиям. При достаточном обосновании могут быть приняты результаты любого эксперимента, даже если прецизионность титрования меньше указанных целевых значений.

5. Снижение вирусной нагрузки необходимо рассчитать на основании экспериментально установленных вирусных титров. По возможности необходимо определить 95% доверительные границы факторов снижения. Приблизительно их можно рассчитать с помощью следующей формулы:

,

где:

s - 95% для содержания вирусов в исходном материале;

a - 95% границы для содержания вирусов в материале после прохождения этапа инактивации (элиминации).

Если после этапа инактивации (элиминации) инфекционность в образце не обнаруживается, фактор снижения невозможно рассчитать статистическими методами. В целях получения оценки минимального фактора снижения титр необходимо принять равным одной инфекционной единице или менее в объеме с наибольшей испытанной концентрацией. Отсутствие признаков инфекционности в пробе будет характерно после применения мощных процессов инактивации. Чтобы максимально увеличить расчетный минимальный фактор снижения вирусной нагрузки с помощью эффективного процесса инактивации, необходимо отбирать как можно большее количество обработанного неразведенного материала.