6.B.7. Особые меры предосторожности

При приготовлении вирусов в высоком титре необходимо соблюдать осторожность, чтобы не допустить их агрегации, которая может улучшить физическую элиминацию, но снизить инактивацию и исказить таким образом корреляцию с фактическим производством.

Необходимо учитывать минимальное количество вируса, содержание которого можно достоверно определить.

В целях анализа снижения инфицирующей способности вируса вследствие разведения, концентрации, фильтрации или хранения проб перед их разведением, в исследование необходимо включать параллельные контрольные методики количественного определения.

"Добавление" вирусов необходимо осуществлять в небольшом объеме, чтобы не разводить продукт или не изменить его свойства. Проба испытуемого белка после его разведения больше не является идентичной продукту, получаемому промышленным способом.

Небольшие различия в буферных растворах, питательной среде, реактивах и т.п. могут значительно повлиять на очистку от вирусов.

Инактивация вирусов зависит от времени, поэтому время, в течение которого продукт, в который добавлен вирус, остается в определенном буферном растворе или определенной хроматографической колонке, должно соответствовать условиям промышленного процесса производства.

Буферные растворы и продукт необходимо оценивать отдельно на токсичность и влияние на результаты методик, применяемых для определения титра вируса, так как эти компоненты могут негативно влиять на индикаторные клетки. Если такие растворы токсичны для индикаторных клеток, могут потребоваться разведение, коррекция pH или диализ буферного раствора, содержащего добавленный вирус. Если продукт обладает собственной противовирусной активностью, может потребоваться проведение исследования очистки без продукта в "имитационном" цикле ("mock" run), хотя при этом исключение продукта или замена его на аналогичный белок, не обладающий противовирусной активностью, может повлиять на поведение вирусов на некоторых этапах производства. Необходимо включить достаточные контроли для оценки влияния процедур, используемых исключительно для приготовления проб для методик определения (например, диализ, хранение), на элиминацию и (или) инактивацию добавленного вируса.

Во многих схемах очистки повторно используются одинаковые или схожие буферные растворы или колонки. При анализе данных это необходимо принимать во внимание. Эффективность конкретного метода элиминации вируса может зависеть от этапа производства, на котором он используется.

Если условия производства или буферные растворы чрезмерно цитотоксичны или вирулицидны, совокупные факторы (коэффициенты) снижения вирусной нагрузки могут быть недооценены, в этом случае оценка проводится в индивидуальном порядке. Ввиду внутренних ограничений или несоответствующего дизайна исследований по очистке от вирусов общие факторы (коэффициенты) снижения вирусной нагрузки могут быть также переоценены.