3.B. Рекомендуемые испытания для выявления и идентификации вирусов

3.B. Рекомендуемые испытания для выявления

и идентификации вирусов

Для выявления эндогенных и посторонних вирусов могут использоваться разные методы количественного определения. В таблице 2 приведены примеры таких испытаний, в том числе все рекомендованные для использования протоколы количественного определения, однако этот перечень не является исчерпывающим или строго заданным.

Таблица 2

Примеры испытаний на наличие вирусов

Испытания	Исследуемый материал	Способность к обнаружению	Ограничения к обнаружению
Образование антител	лизат клеток и их культуральная среда	специфичные вирусные антигены	антигены не инфекционные для антигены животной тест-системы
Скрининг вируса in vivo	лизат клеток и их культуральная среда	широкий спектр вирусов, патогенных для человека	возбудители, которые не реплицируются или не вызывают заболеваний в тест-системах
Скрининг вируса in vitro для:		широкий спектр вирусов, патогенных для человека	возбудители, которые не способны к репликации или не вызывают поражений в тест-системах
1) характеристики Банка клеток	лизат клеток и их культуральная среда (при совместном культивировании исследуемый материал должен содержать интактные клетки)	широкий спектр вирусов, патогенных для человека
2) скрининга производства	сбор необработанного продукта или лизат клеток и их культуральные среды из промышленного реактора
Трансмиссионная электронная микроскопия на:		вирус и вирусоподобные частицы	качественный анализ с оценкой идентичности
1) клеточном субстрате	жизнеспособные клетки
2) супернатанте клеточной культуры	бесклеточный супернатант культуры
Обратная транскриптаза (RT)	бесклеточный супернатант культуры	ретровирусы и экспресированная ретровирусная обратная транскриптаза	определяет только ферменты с оптимальной активностью при предпочтительных условиях, интерпретация может представлять сложность в связи с наличием клеточных ферментов, фона в некоторых концентрированных образцах
Инфицирующая способность ретровирусов (RV)	бесклеточный супернатант культуры	инфекционные ретровирусы	ретровирусы, не способные реплицироваться или не формирующие дискретные очаги или бляшки в выбранной тест-системе
Совместное культивирование	жизнеспособные клетки	инфекционные ретровирусы	ретровирусы, не способные реплицироваться
1) конечная точка инфицирующей способности			ретровирусы, не способные реплицироваться или не формирующие дискретные очаги или бляшки в выбранной тест-системе
2) конечная точка трансмиссионной электронной микроскопии			качественный анализ с оценкой идентичности кроме того, сложно отличить исследуемый материал от индикаторных клеток
3) конечная точка обратной транскриптазы			определяет только ферменты с оптимальной активностью при предпочтительных условиях. Интерпретация может представлять сложность в связи с наличием клеточных ферментов, фона в некоторых концентрированных образцах
ПЦР	клетки, культуральная жидкость и прочие материалы	специфичные последовательности вируса	должны присутствовать праймеры, не определяет инфицирующую способность вируса

Поскольку большинство используемых методик может изменяться с учетом научного прогресса, возможно использование альтернативных подходов при наличии данных, обосновывающих их применение. Производителям рекомендуется обсуждать такие альтернативные подходы с уполномоченными органами государств-членов. В отдельных ситуациях может потребоваться проведение других испытаний. Испытания должны включать в себя надлежащие контрольные материалы, гарантирующие достаточную чувствительность и специфичность. Во всех случаях, когда по виду животного - источнику происхождения клеточного субстрата - можно с относительно высокой вероятностью выявить наличие определенного вируса, может потребоваться проведение специальных испытаний и (или) применение других подходов. Если используемая в производстве клеточная линия получена от человекообразных или нечеловекообразных обезьян, необходимо дополнительно (при отсутствие должного обоснования) проверить ее на наличие таких вирусов человека, как вирусы, вызывающие иммунодефицита или гепатиты. Для выявления последовательностей нуклеиновых кислот, характерных для этих и других специфичных вирусов, может использоваться ПЦР. Далее представлено краткое описание общих принципов положений, в соответствии с которыми производитель должен обосновать свои действия.

3.A.3. Клетки предельного для производства клеточного возраста in vitro 3.B.1. Испытания на наличие ретровирусов