Исследования in vitro

В целях оценки любых различий в свойствах между биоаналогичным (биоподобным) и референтным лекарственными препаратами необходимо провести сравнительные in vitro испытания на связывание с рецептором, а также испытания на последующую биологическую активность. Частично эти данные могут быть доступны по результатам испытаний, проведенных с целью определения активности при оценке физико-химических характеристик. Необходимо подтвердить чувствительность испытаний при изучении сопоставимости для выявления любых значимых различий и то, что эксперименты проведены с достаточным числом повторностей, разведений или временных точек на кривой с целью правильной характеристики зависимости "концентрация - эффект" или "время - эффект". Биоаналогичный (биоподобный) и оригинальный (референтный) лекарственные препараты необходимо сравнивать параллельно в одном эксперименте. Все испытания должны включать надлежащие контроли, подтверждающие валидность и пригодность метода.

Необходимо подтвердить сопоставимость связывания с обоими рецепторами инсулина человека (ИР-A и ИР-B), в том числе кинетику включения - выключения. С этой целью возможно использование клеток искусственно экспрессирующих ИР-A или ИР-B соответственно. При использовании клеток, эндогенно экспрессирующих ИР-A или ИР-B, необходимо подтвердить то, что действительно присутствует лишь один рецептор. Иначе возникают затруднения в интерпретации результатов связывания. При использовании другого современного метода изучения связывания необходимо обосновать выбор такого метода.

Биологическую активность необходимо сравнить на двух уровнях: (1) аутофосфорилирование рецептора и (2) метаболическая активность. В целом митогенная активность, опосредуемая стимуляцией рецептора ИФР-1, может быть не значима для инсулина человека и большинства аналогов инсулина. Однако, если применимо, допускается изучить сравнительное связывание с рецептором ИФР-1 и функциональную активность, чтобы охватить этот потенциальный токсикологический эффект. В отношении аутофосфорилирования рецепторов необходимо обеспечить, чтобы динамический диапазон используемого в испытании метода обнаружения не был слишком узким, поскольку это снизит возможность обнаружения значимых различий в степени аутофосфорилирования рецептора. Доступны различные методы изучения метаболической активности, включая методы определения образования гликогена, липогенеза, ингибирования стимулированного липолиза, а также транспорта глюкозы. Эти процессы можно изучить на различных клетках. В целях подтверждения сопоставимости необходимо использовать по меньшей мере три различных метода изучения метаболической активности. Данные должны давать четкое видение соотношения агонистических свойств биоаналогичного (биоподобного) и референтного лекарственных препаратов в отношении инсулинового рецептора. Выбор методов изучения метаболической активности необходимо обосновать в соответствии с указанными критериями.