Оценка соблюдения обязательных требований, содержащихся в данном документе, привлечение к административной ответственности за их несоблюдение допускаются до 1 сентября 2025 года (Постановление Правительства РФ от 31.12.2020 N 2467).
Приказ Росрыболовства от 04.08.2009 N 695 (ред. от 22.12.2016) "Об утверждении Методических указаний по разработке нормативов качества воды водных объектов рыбохозяйственного значения, в том числе нормативов предельно допустимых концентраций вредных...

1.4. Проведение исследований

Опыты проводят при оптимальной температуре и освещении (п. 1.3 Приложения 2). Используют водоросли в экспоненциальной фазе роста, что соответствует трехсуточной культуре водорослей после пересева. Плотность культуры в колбе в это время достигает примерно 5 млн. кл/см3.

В опыте используют начальную плотность клеток 25 тыс. кл/см3. Для этого нужная плотность клеток в опыте достигается расчетом, исходя из объема тестируемой (контрольной, опытной) воды (например, 100 мл) и численности клеток в культуре в экспоненциальной фазе роста (примерно 5 млн. кл/см3). В указанном случае в опытную и контрольную воду добавляется по 0,5 см3 трехсуточной культуры водорослей.

Периодически (не реже 1 раза в месяц) необходимо проводить контроль

физиологической чувствительности водорослей. Для этого используют

стандартное (эталонное) вещество - двухромовокислый калий K Cr O марки

2 2 7

химически чистый ("хч") или стандарт-титр калия двухромовокислого.

Готовят маточный раствор двухромокислого калия концентрацией 1 г/дм3.

Далее методом разбавления - серию растворов с концентрациями 0,12; 0,25;

0,5; 1,0; 2,0; 3,0 мг/л. Исследование проводят в течение 48 ч в трех

повторностях. По результатам опыта рассчитывают среднюю концентрацию

K Cr O , вызывающую уменьшение численности клеток на 50% за 48 ч (ЛК за

2 2 7 50

48 ч). Если полученное значение ЛК находится в интервале 1,3 - 2,5 мг/л,

50

то культура водорослей может быть использована для экспериментов.

Если полученные значения ЛК не попадают в указанный интервал, то

50

эксперименты с водорослями не проводят, выясняют причину (условия

культивирования, состав культуральной среды и проч.). Иногда культуру

водорослей заменяют и проводят эксперименты заново.

При постановке острых и хронических экспериментов в контрольные и опытные колбы емкостью 250 мл наливают по 100 мл (в колбы емкостью 100 мл - по 50 мл) контрольной среды или исследуемой концентрации вещества. Контролем служит культуральная среда, на которой культивируются водоросли (среда Прата или среда Успенского N 1). Концентрации веществ также готовят на соответствующей среде.

В опытные и контрольные колбы пипеткой добавляют по 0,5 см3 (0,25 см3) культуры водорослей в экспоненциальной фазе роста.

Колбы закрывают ватно-марлевыми пробками или фольгой, их содержимое тщательно перемешивают и в каждой колбе определяют исходную численность клеток, которая должна составлять 25 тыс. кл/см3. Колбы помещают в люминостат.

В эксперименте должно быть исследовано не менее 5 концентраций вещества. Повторность трехкратная.

Эксперименты на водорослях проводятся в 2 этапа: предварительный и основной (окончательный).

В предварительном остром эксперименте находят интервал токсичных концентраций. Опыты проводят в широком диапазоне концентраций вещества, которые отличаются в геометрической прогрессии (коэффициент 10). Например, 0,01; 0,1; 1,0; 10,0 мг/л и т.д. Исследуют не менее пяти концентраций в двух повторностях. По результатам эксперимента определяется диапазон концентраций для основного острого и хронического эксперимента.

В основном остром и хроническом эксперименте шаг между концентрациями изменяется в 2 - 5 раз. Исследуют не менее пяти концентраций в трех повторностях.

Подсчет клеток водорослей проводят в остром опыте ежедневно, в хроническом на 1, 2, 3, 4, 7, 10, 14 сутки.

На 14 сутки от начала эксперимента опыт прекращают и устанавливают, оказывают ли исследуемые концентрации вещества хроническое токсическое или эвтрофирующее действие на водоросли.

Таблица 1.3.1 1.5. Учет и анализ результатов