Опыты проводят при оптимальной температуре и освещении, как и культивирование водорослей (п. 1.3 Приложения 3). Используют водоросли в экспоненциальной фазе роста, что соответствует трехсуточной культуре водорослей после пересева. Плотность культуры в колбе в это время достигает примерно 5 млн. кл/мл.
В опыте используют начальную плотность клеток 25 тыс. кл/см. Для этого нужная плотность клеток в опыте достигается расчетом, исходя из объема исследуемой концентрации вещества (например, 100 см3) и численности клеток в культуре в экспоненциальной фазе роста (5 млн. кл/см3). В указанном случае в опытную и контрольную среду добавляется по 0,5 см3 трехсуточной культуры водорослей.
Периодически (не реже 1 раза в месяц) необходимо проводить контроль
физиологической чувствительности водорослей. Для этого используют эталонное
химическое вещество - двухромовокислый калий K Cr O марки "хч" или
2 2 7
стандарт-титр калия двухромокислого. Готовят маточный раствор
двухромовокислого калия концентрацией 1 г/м3. Далее методом разбавления
готовят серию растворов с концентрациями 1,0; 2,5; 5,0; 7,5 и 10,0 мг/дм3.
Исследование проводят в течение 96 ч. На основании полученных результатов
рассчитывают среднюю концентрацию K Cr O , вызывающую уменьшение
2 2 7
численности клеток на 50% за 96 ч (ЛК за 96 ч). Если полученное значение
50
ЛК находится в интервале 5,8 - 10,0 мг/дм3, то культура водорослей может
50
быть использована для экспериментов.
Если полученные значения ЛК не попадают в интервал 5,8 - 10,0 мг/дм3,
50
то эксперименты с водорослями не проводят, выясняют причину (условия
культивирования, состав культуральной среды и прочее). Иногда культуру
водорослей заменяют и проводят эксперименты заново.
При постановке острых и хронических экспериментов в контрольные и опытные колбы емкостью 250 см3 наливают по 100 см3 (в колбы емкостью 100 см3 наливают по 50 см3) контрольной среды и исследуемые концентрации вещества. Контролем служит среда Гольдберга. Исследуемые концентрации веществ также готовят на среде Гольдберга.
Затем в опытные и контрольные колбы пипеткой добавляют по 0,5 см3 (0,25 см3) культуры водорослей в экспоненциальной фазе роста.
Колбы закрывают ватно-марлевыми пробками или фольгой, их содержимое тщательно перемешивают и в каждой колбе определяют исходную численность клеток, которая должна составлять 25 тыс. кл/мл. Колбы помещают в люминостат (или в климатостат) и экспонируют в течение трех суток (острый) или четырнадцати суток (хронический) эксперимент.
В эксперименте должно быть исследовано не менее 5 концентраций вещества. Повторность трехкратная.
Эксперименты на водорослях проводятся в 2 этапа: предварительный и основной (окончательный).
В предварительном остром эксперименте находят интервал токсичных концентраций. Опыты проводят в широком диапазоне концентраций вещества, которые отличаются в геометрической прогрессии (коэффициент 10). Например, 0,01; 0,1; 1,0; 10,0 мг/л и т.д. Исследуют не менее пяти концентраций в двух повторностях. По результатам эксперимента определяется диапазон концентраций для основного острого и хронического эксперимента.
В основном остром и хроническом эксперименте шаг между концентрациями различается в 2 - 5 раз. Исследуют не менее пяти концентраций в трех повторностях.
Подсчет клеток водорослей проводят в остром опыте ежедневно, в хроническом на 1, 2, 3, 4, 7, 10, 14 сутки.
На 14 сутки от начала эксперимента опыт прекращают и устанавливают, оказывают ли исследуемые концентрации вещества хроническое токсическое (или эвтрофирующее) действие на водоросли.
- Гражданский кодекс (ГК РФ)
- Жилищный кодекс (ЖК РФ)
- Налоговый кодекс (НК РФ)
- Трудовой кодекс (ТК РФ)
- Уголовный кодекс (УК РФ)
- Бюджетный кодекс (БК РФ)
- Арбитражный процессуальный кодекс
- Конституция РФ
- Земельный кодекс (ЗК РФ)
- Лесной кодекс (ЛК РФ)
- Семейный кодекс (СК РФ)
- Уголовно-исполнительный кодекс
- Уголовно-процессуальный кодекс
- Производственный календарь на 2023 год
- МРОТ 2024
- ФЗ «О банкротстве»
- О защите прав потребителей (ЗОЗПП)
- Об исполнительном производстве
- О персональных данных
- О налогах на имущество физических лиц
- О средствах массовой информации
- Производственный календарь на 2024 год
- Федеральный закон "О полиции" N 3-ФЗ
- Расходы организации ПБУ 10/99
- Минимальный размер оплаты труда (МРОТ)
- Календарь бухгалтера на 2024 год
- Частичная мобилизация: обзор новостей