Таблица 3 - Основные биохимические показатели для диагностики гомоцистинурии

- Рекомендовано использование молекулярно-генетических методов для идентификации гомозиготных или компаунд-гетерозиготных мутаций гена CBS с целью обоснования диагноз [2, 5, 11, 12].

(Сила рекомендации B; уровень доказательств II)

Комментарии: Ген CBS содержит 17 экзонов, разделенных 16 интронами. Размер гена составляет 22,74 т.п.н. Два первых экзона гена не транскрибируются.

К настоящему времени в гене CBS описано более 170 различных мутаций. 67% - это миссенс мутации, большинство из которых являются уникальными. Нонсенс мутаций насчитывается только 9; остальные - представлены мелкими делециями, вставками и мутациями сайт-сплайсинга. Недавно описана единственная протяженная делеция в гене. Остальные делеции не превышают более 100 пар нуклеотидов.

В РФ ДНК-диагностика проводится методом полимеразной цепной реакции (ПЦР) с последующим рестрикционным анализом. Таким методом был проведен скрининг на наиболее частые мутации гена CBS - p.Ile278Thr и p.Gly307Ser. С помощью прямого нерадиоактивного секвенирования осуществлен анализ открытой рамки считывания гена CBS.

Определение мутаций в гене CBS важно для окончательного подтверждения диагноза, эффективного медико-генетического консультирования и прогнозирования тяжести течения болезни. Необходимо учитывать, что большинство пациентов во всем мире являются компаунд гетерозиготами, в том числе по новым патогенным вариантам.

Так, известно, что мутация p.Ile278Thr обусловливает развитие легкой формы заболевания, она является наиболее частой (25%) среди различных популяций мира, но в России выявлена только у одного больного. Мутация p.Gly307Ser, ответственная за формирование тяжелой клинической симптоматики болезни (B₆ - резистентная форма), выявляется в основном у пациентов кельтского происхождения (Шотландия, Ирландия, Франция, Португалия), а у российских пациентов она не была обнаружена. Установлено, что в Чехии, Словакии и Польше наиболее часто встречаются мутации p.Ile278Thr и IVS11-2A->C, обе приводящие к развитию более легкого B₆ - зависимого фенотипа. Мутация сайта-сплайсинга IVS11-2A->C является наиболее частой и у российских пациентов (зарегистрирована у 6 из 9 обследованных).

У двух сибсов была обнаружена мутация c.1560 - 1569del CACCGGGAAG, сведения о которой в литературе отсутствуют. По всей вероятности, данная мутация ответственна за формирование тяжелой B₆-резистентной формы гомоцистинурии и ассоциирована с развитием у больных выраженных психоневрологических расстройств (периодическое развитие психозов, плохо купирующихся медикаментозно). В таблице 4 представлен спектр мутаций у 11 российских больных с классической гомоцистинурией.