СПЕЦИФИЧНОСТЬ

Специфичность представляет собой способность к однозначной оценке наличия нуклеиновой кислоты в смеси с компонентами, присутствие которых можно ожидать.

Специфичность аналитических методик, основанных на амплификации нуклеиновых кислот, зависит от выбора праймеров, выбора зонда (для анализа конечного продукта) и обоснованности условий проведения испытания (как для стадии амплификации, так и для стадии детектирования).

При разработке праймеров и зондов должна быть исследована их специфичность в отношении детектирования только РНК HCV путем сравнения выбранной последовательности нуклеотидов с последовательностями нуклеотидов, опубликованными в банках данных. В случае HCV праймеры (и зонды) обычно выбирают из областей 5'-некодирующего участка генома HCV, которые консервативны для всех генотипов.

Амплифицированный продукт должен однозначно идентифицироваться одним из методов, например, проведением амплификации с вложенными праймерами (гнездовая ПЦР), испытанием с использованием ферментов рестрикции, секвенированием или гибридизацией со специфическим зондом.

Для валидации специфичности аналитической методики испытание должно быть проведено в отношении не менее 100 образцов РНК HCV-отрицательных пулов плазмы, для которых должно быть доказано отсутствие реакции.

Способность аналитической методики к обнаружению всех генотипов HCV также зависит от выбора праймеров, зондов и параметров методики. Эта способность должна быть подтверждена с использованием охарактеризованных панелей сравнения. Однако ввиду сложности получения некоторых генотипов (например, генотипа 6) должны быть на подходящем уровне детектированы генотипы преобладающих типов (например, в Европе - генотипы 1 и 3).