2.1.11.17. МЕТИЛПЕНТОЗЫ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Испытуемый раствор. Содержимое упаковки с испытуемым образцом количественно переносят в мерную колбу подходящего объема и доводят водой P для получения раствора полисахарида с концентрацией около 5 мг/мл. Разводят раствор так, чтобы объемы, используемые в испытании, содержали от 2 мкг до 20 мкг рамнозы (метилпентозы). Помещают 0,25 мл, 0,50 мл и 1,0 мл полученного раствора в 3 пробирки.

Растворы сравнения. 0,100 г рамнозы P растворяют в воде P и доводят тем же растворителем до объема 100,0 мл (основной раствор с концентрацией метилпентозы 1 г/л). Непосредственно перед использованием 1,0 мл основного раствора доводят водой P до объема 50,0 мл (рабочее разведение с концентрацией метилпентозы 20 мг/л). В 5 пробирок помещают 0,10 мл, 0,25 мл, 0,50 мл, 0,75 мл и 1,0 мл рабочего разведения.

Компенсационный раствор. Готовят, используя 1,0 мл воды P.

Объем раствора в каждой пробирке доводят водой P до 1,0 мл. Пробирки помещают в ледяную баню, прибавляют по каплям при постоянном помешивании по 4,5 мл охлажденной смеси, состоящей из одного объема воды P и 6 объемов серной кислоты P. Пробирки нагревают до температуры от 15 °C до 25 °C и далее продолжают нагревание на водяной бане в течение нескольких минут. Охлаждают до температуры от 15 °C до 25 °C. В каждую пробирку прибавляют по 0,10 мл приготовленного непосредственно перед использованием раствора 30 г/л цистеина гидрохлорида P. Пробирки встряхивают и выдерживают 2 ч.

Измеряют оптическую плотность (2.1.2.24) растворов при длинах волн 396 нм и 430 нм. Для каждого раствора рассчитывают разницу между значением оптической плотности, измеренным при длине волны 396 нм, и ее значением, измеренным при длине волны 430 нм.

Строят калибровочную кривую зависимости значений оптической плотности пяти растворов сравнения от соответствующего содержания метилпентозы и с ее помощью определяют концентрацию метилпентозы в испытуемом растворе для каждого исследуемого объема. Рассчитывают среднее по трем значениям концентрации метилпентозы.

201110018-2023