МЕТОДЫ ИММУНОПРЕЦИПИТАЦИИ

Методы иммунопреципитации включают флокуляцию и преципитацию. При смешивании раствора антигена с соответствующим антителом в определенных условиях образуются флокулирующие или преципитирующие агрегаты. Соотношение концентраций реактивов, обеспечивающее наименьшее время флокуляции или наиболее выраженную преципитацию, называют оптимальным соотношением. Такое соотношение обычно получают при смешивании антигенов и антител в эквивалентных количествах. Иммунопреципитацию оценивают визуально или с помощью методов светорассеяния (нефелометрия или турбидиметрия). Для повышения чувствительности в качестве реактивов можно использовать частицы (например, из латекса), покрытые антигенами или антителами.

В методах флокуляции обычно используют пошаговое разведение одного из реактивов, а в методах иммунодиффузии разведение происходит в процессе диффузии в гель и таким образом достигают градиента концентраций одного или обоих реактантов. При этом в геле образуются зоны с соотношением реактантов, оптимальным для преципитации. Постановку реакции флокуляции выполняют в пробирках, тогда как в методах иммунодиффузии используют различные носители: пробирки, планшеты, предметные стекла, ячейки или камеры.

Системы иммунопреципитации могут быть простыми, комплексными и множественными. Простая система состоит из одного антигена в сочетании с соответствующим антителом; комплексная - из родственных, но серологически неидентичных реактантов, множественная - из нескольких серологически неродственных реактантов.

В методах простой диффузии градиент концентрации устанавливают только для одного реактанта, диффундирующего из внешнего источника в гель, который содержит соответствующий реактант в сравнительно низкой концентрации.

Простая (одиночная, радиальная) иммунодиффузия - количественный метод, при котором антиген (антитело), диффундируя в гель, образует кольцо преципитации с соответствующим ему антителом (антигеном). При достижении равновесия между антигеном и антителом, площадь образовавшегося кольца преципитации прямо пропорциональна содержанию антигена (антитело) и обратно пропорциональна содержанию антитела (антигена) в геле.

В методах двойной диффузии градиенты концентрации устанавливают для обоих реактантов. И антиген, и антитело из различных участков диффундируют в первоначально иммунологически нейтральный гель.

Методы сравнительной двойной диффузии используют для качественного сравнения различных антигенов по отношению к подходящему антителу или наоборот. Сравнение основано на наличии или отсутствии взаимодействия между компонентами преципитации. Реакции идентичности, неидентичности и частичной идентичности антигенов (антител) могут быть различными.