Мешающие факторы

Испытуемое лекарственное средство может содержать мешающие факторы, усиливающие и/или ингибирующие реакцию лизата амебоцитов с бактериальными эндотоксинами. Обнаружить эти явления можно, сравнив способность используемого лизата амебоцитов реагировать с раствором КСЭ в воде для БЭТ и в растворе испытуемого лекарственного средства в стандартных условиях проведения эксперимента.

Испытанию может быть подвергнуто лекарственное средство в любом разведении, не превышающем значения МДР. Используемые в данном анализе пробы испытуемого лекарственного средства (или его разведения) не должны содержать бактериальных эндотоксинов в определяемых в тесте количествах.

Процедура испытания. Для проведения анализа готовят растворы A - D по схеме, приведенной в Таблице 2.1.6.8.-2.

Таблица 2.1.6.8.-2. - Схема эксперимента "Мешающие факторы"

Раствор A - испытуемое лекарственное средство в выбранном разведении (контроль отсутствия бактериальных эндотоксинов);

Растворы B - серия разведений КСЭ в растворе испытуемого лекарственного средства (выявление возможности ингибирования или усиления реакции);

Растворы C - серия разведений КСЭ в воде для БЭТ (положительный контроль);

Раствор D - вода для БЭТ (отрицательный контроль).

Результаты и интерпретация. Результаты эксперимента считаются достоверными, если:

- для растворов A и D получены отрицательные результаты во всех повторностях;

- для растворов C (положительный контроль) среднее геометрическое значение концентрации бактериальных эндотоксинов составляет не менее и не более .

По результатам, полученным для каждой из повторностей растворов B, рассчитывают среднее геометрическое значение чувствительности лизата амебоцитов. Расчет проводят, как описано в разделе "Подтверждение заявленной чувствительности лизата амебоцитов". Если полученное среднее значение оказалось не менее и не более , считают доказанным, что испытуемое лекарственное средство в выбранном разведении не содержит мешающих факторов, способных ингибировать и/или усиливать реакцию лизата амебоцитов с бактериальными эндотоксинами и оно может быть подвергнуто анализу на содержание бактериальных эндотоксинов.

Если обнаружено присутствие мешающих факторов для испытуемого лекарственного средства, которое проверялось в разведении, меньшем МДР, анализ повторяют в большем разведении, вплоть до разведения, равного МДР. В большинстве случаев дополнительное разведение испытуемого лекарственного средства способно устранить действие мешающих факторов. Использование лизата амебоцитов большей чувствительности позволяет увеличить степень разведения.

Действие мешающих факторов может быть преодолено соответствующей подготовкой образца, например, фильтрацией, нейтрализацией, диализом или температурной обработкой. Выбранный способ удаления мешающих факторов не должен изменять концентрацию бактериальных эндотоксинов в испытуемом лекарственном средстве, поэтому к раствору испытуемого лекарственного средства КСЭ известной концентрации добавляют перед проведением такой обработки, после чего проводят анализ "Мешающие факторы". Если после обработки выбранным способом результаты анализа окажутся удовлетворительными, то испытуемое лекарственное средство может быть подвергнуто анализу на содержание бактериальных эндотоксинов.

Если испытуемое лекарственное средство нельзя освободить от мешающих факторов, оно не может быть исследовано с помощью теста, определяющего содержание бактериальных эндотоксинов.