3-2. БАКТЕРИИ ESCHERICHIA COLI

3-2-1. Испытание на отсутствие бактерий E. coli (качественный метод). 10 г (мл) испытуемого образца, растворенного или разбавленного стерильным фосфатно-буферным раствором 1:10, переносят в количестве 10 мл (соответствует 1 г или 1 мл испытуемого образца) в 100 мл соево-казеинового бульона (или среды N 8). Перемешивают и инкубируют в течение 18 - 24 ч. 1 мл содержимого флакона переносят в 100 мл бульона Мак-Конки (или среды N 3) и инкубируют 24 - 48 ч при температуре (43 +/- 1) °C.

Делают пересев из жидкой питательной среды бактериологической петлей на агар Мак-Конки или среду N 4. Посевы инкубируют в течение 18 - 72 ч (агар Мак-Конки) или 18 - 24 ч (среда N 4). Если после инкубации на плотных питательных средах выявлены колонии, типичные для E. coli (табл. 2.1.6.7.-2), их микроскопируют. При обнаружении в мазках мелких грамотрицательных палочек отдельные типичные колонии пересевают в пробирки на скошенный соево-казеиновый агар или среду N 1 и инкубируют в течение 18 - 24 ч для накопления чистой культуры микроорганизма.

Для идентификации выделенных бактерий используют биохимические тесты на цитохромоксидазу (п. 4-1), индол (п. 4-2) и способность утилизировать натрия цитрат. Для этого из пробирок с чистой культурой делают пересевы на агар Симмонса (среду N 14) и соево-казеиновый бульон (среду N 15). Через 18 - 24 ч инкубации отмечают рост бактерий или его отсутствие на агаре Симмонса (среде N 14). Утилизацию цитрата устанавливают по смещению pH среды в щелочную сторону (изменению цвета среды с зеленого на синий). Наличие индола определяют по появлению красного кольца на поверхности соево-казеинового бульона (среды N 15) при добавлении реактива Ковача.

Если в ходе исследования обнаруживают типичные грамотрицательные палочки, не содержащие фермент цитохромоксидазу, не утилизирующие натрия цитрат и образующие индол, считают, что образец контаминирован бактериями E. coli.

3-2-2. Количественное определение бактерий E. coli.

Метод 1. Количественное определение E. coli проводят так же, как и количественное определение энтеробактерий, устойчивых к желчи (п. 3-1-2), делая пересев из гомогената А в пробирки с бульоном Мак-Конки (средой N 3), инкубируют при (43 +/- 1) °C 24 - 48 ч. Из каждой пробирки делают пересев бактериологической петлей на агар Мак-Конки (среду N 4). Посевы инкубируют при температуре в течение 18 - 48 ч (агар Мак-Конки) или 18 - 24 ч (среда N 4).

Метод 2. Готовят образец с использованием разведения 1:10 из не менее 1 г (мл) испытуемого продукта так, как указано в статье 2.1.6.6. Для посева используют 3 пробирки с 9 мл соево-казеинового бульона (среды N 8), в которые вносят по 1 мл разведения образца, соответствующего 0,1; 0,01 и 0,001 г (мл). Перемешивают и инкубируют в стандартных условиях в течение 18 - 24 ч. По истечении срока инкубации по 1 мл содержимого пробирок переносят в 100 мл бульона Мак-Конки и инкубируют при температуре (43 +/- 1) °C в течение 24 - 48 ч. Делают пересев на агар Мак-Конки. Посевы инкубируют в стандартных условиях в течение 18 - 72 ч.

При обнаружении на указанных средах типичных колоний бактерий (табл. 2.1.6.7.-2), по морфологическим и тинкториальным свойствам представляющих собой грамотрицательные палочки, которые не содержат фермент цитохромоксидазу, не утилизируют натрия цитрат и образуют индол, делают вывод, что ЛС контаминировано бактериями E. coli. Наиболее вероятное количество клеток E. coli в 1 г или в 1 мл испытуемого образца определяют по табл. 2.1.6.7.-1.