Методика

Жидкофазный гидролиз. Образец белка или пептида помещают в ампулу для гидролиза и высушивают (образец сушат для того, чтобы вода в образце не разбавляла кислоту, используемую для гидролиза). Прибавляют гидролизующий раствор из расчета 200 мкл на 500 мкг лиофилизированного белка. Образец в ампуле замораживают в бане с сухим льдом и ацетоном и запаивают в вакууме при помощи пламени. Образцы обычно гидролизуют при температуре 110 °C в течение 24 ч в вакууме или в атмосфере инертного газа для предотвращения окисления. Если есть подозрение, что испытуемый белок полностью не гидролизуется, рассматривают возможность проведения гидролиза в течение более продолжительного времени (например, 48 ч и 72 ч).

Парофазный гидролиз. Это один из наиболее общих методов кислотного гидролиза. Он предпочтителен для микроанализа, когда доступны лишь небольшие количества образца. При использовании парофазного гидролиза контаминация образца кислотными реактивами минимизирована. Флаконы с высушенными образцами помещают в сосуд, содержащий подходящее количество гидролизующего раствора. Гидролизующий раствор не должен контактировать с испытуемым образцом. В свободном пространстве сосуда создают инертную атмосферу или вакуум (менее 200 мкм ртутного столба, или 26,7 Па) и для проведения гидролиза нагревают при температуре около 110 °C в течение 24 ч. Пары кислоты гидролизуют сухой образец. Возможность конденсации кислоты во флаконах с образцом должна быть сведена к минимуму. После гидролиза испытуемый образец сушат в вакууме до удаления остатков кислоты.