НЕПОДВИЖНАЯ ФАЗА

В высокоэффективной жидкостной хроматографии используются неподвижные фазы следующих типов:

- силикагель, оксид алюминия или пористый графит, используемый в нормально-фазовой хроматографии, в которой разделение основано на разнице в адсорбции и/или массовом распределении (распределительная хроматография);

- большое количество химически модифицированных носителей, изготовленных из полимеров, силикагеля или пористого графита, используемых в нормально-фазовой (адсорбционная хроматография) и обращенно-фазовой хроматографии, в которой разделение основано на разделении молекул между подвижной и неподвижной фазой;

- смолы или полимеры, модифицированные кислотными или основными группами, используемые в ионообменной хроматографии, в которой разделение основано на конкурирующем взаимодействии между разделяемыми ионами и ионами подвижной фазы;

- пористый силикагель или полимеры, используемые в эксклюзионной хроматографии, в которой разделение основано на разнице в размерах молекул, соответствующих стерической эксклюзии;

- специальные химически модифицированные неподвижные фазы, например, производными целлюлозы или амилозы, белками и пептидами, циклодекстринами и т.д., используемые для разделения энантиомеров (хроматография на хиральных неподвижных фазах);

- другие неподвижные фазы, используемые в высокоэффективных модификациях различных типов жидкостной хроматографии.

Большая часть разделений основана на механизме распределения между химически модифицированным силикагелем, использующимся в качестве неподвижной фазы, и полярными растворителями, использующимися в качестве подвижной фазы. Поверхность носителя, например, силанольные группы силикагеля, реагирует с различными силановыми реагентами с образованием ковалентно связанных силильных производных, покрывающих различное число активных групп на поверхности носителя. Природа привитой фазы является важной характеристикой, определяющей разделяющие свойства хроматографической системы.

Ниже представлены наиболее часто используемые привитые фазы:

При отсутствии других указаний производителя, находящаяся в колонках обращенно-фазовая неподвижная фаза на основе силикагеля считается стабильной в подвижных фазах при значениях pH в диапазоне от 2,0 до 8,0. Колонки, содержащие пористый графит или частицы полимерных материалов, например, сополимера стирола с дивинилбензолом, стабильны в более широком диапазоне значений pH.

В некоторых случаях для анализа применяют нормально-фазовую хроматографию, используя в качестве неподвижной фазы немодифицированный силикагель, пористый графит или силикагель, химически модифицированный полярными группами (например, цианопропильными или диольными).

Размер частиц для большинства используемых неподвижных фаз составляет от 2 мкм до 10 мкм. Частицы могут иметь сферическую или неправильную форму, различную пористость и удельную площадь поверхности. Эти параметры определяют хроматографическое поведение конкретных неподвижных фаз. В обращенно-фазовой хроматографии дополнительными определяющими факторами являются природа неподвижной фазы, степень связывания, выражаемая содержанием углерода, и эндкепирование (т.е. силилирование оставшихся силанольных групп). Остаточные силанольные группы могут являться причиной размывания заднего фронта пика, особенно для веществ основного характера.

Кроме пористых частиц могут быть использованы поверхностно-пористые или монолитные материалы.

При отсутствии других указаний в частной фармакопейной статье в аналитической хроматографии используют колонки из нержавеющей стали различной длины и внутреннего диаметра. Колонки с внутренним диаметром менее 2 мм часто относят к микроколонкам. Температура подвижной фазы и колонки в течение анализа должна быть постоянной. Большинство анализов проводится при комнатной температуре, но для обеспечения оптимального функционирования колонки может потребоваться использование других температур.