2.1.11.16. ГЕКСОЗАМИНЫ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Испытуемый раствор. Содержимое упаковки с испытуемым образцом количественно переносят в мерную колбу подходящего объема и доводят водой P для получения раствора полисахарида с концентрацией около 5 мг/мл. Разводят раствор так, чтобы объемы, используемые в испытании, содержали от 125 мкг до 500 мкг глюкозамина (гексозамина). Помещают 1,0 мл полученного раствора в градуированную пробирку.

Растворы сравнения. 60 мг глюкозамина гидрохлорида P растворяют в воде P и доводят тем же растворителем до объема 100,0 мл (основной раствор с концентрацией глюкозамина 0,500 г/л). Помещают 0,25 мл, 0,50 мл, 0,75 мл и 1,0 мл основного раствора в 4 градуированные пробирки.

Компенсационный раствор. Готовят, используя 1,0 мл воды P.

Ацетилацетоновый реактив. Готовят непосредственно перед использованием. Смешивают один объем ацетилацетона P и 50 объемов раствора 53 г/л натрия карбоната безводного P.

Диметиламинобензальдегида раствор. Готовят непосредственно перед использованием. Растворяют 0,8 г диметиламинобензальдегида P в 15 мл этанола (96%) P и прибавляют 15 мл хлороводородной кислоты P.

Объем раствора в каждой пробирке доводят водой P до 1,0 мл. В пробирки прибавляют по 1,0 мл раствора 824 г/л хлороводородной кислоты P, закрывают пробками, выдерживают в водяной бане 1 ч и охлаждают до температуры от 15 °C до 25 °C. Далее в пробирки прибавляют по 0,05 мл раствора 5 г/л тимолфталеина P в этаноле (96%) P. Добавляют раствор 200 г/л натрия гидроксида P до появления голубого окрашивания, а затем раствор 103 г/л хлороводородной кислоты P до обесцвечивания раствора. Объем раствора в каждой пробирке доводят водой P до 10,0 мл (нейтрализованные гидролизаты).

Во вторую серию градуированных пробирок объемом 10 мл помещают по 1,0 мл каждого нейтрализованного гидролизата. В пробирки прибавляют по 1,0 мл ацетилацетонового реактива. Пробирки закрывают пробками, выдерживают в водяной бане при температуре 90 °C в течение 45 мин и охлаждают до температуры от 15 °C до 25 °C. В пробирки прибавляют по 2,5 мл этанола (96%) P и 1,0 мл раствора диметиламинобензальдегида, доводят объем растворов в пробирках этанолом (96%) P до 10,0 мл. Пробирки закрывают, содержимое перемешивают, переворачивая пробирки, и выдерживают в темном месте 90 мин.

Измеряют оптическую плотность (2.1.2.24) растворов при длине волны 530 нм относительно компенсационного раствора.

Строят калибровочную кривую зависимости значений оптической плотности четырех растворов сравнения от соответствующего содержания гексозамина и с ее помощью определяют концентрацию гексозамина в испытуемом растворе.

201110017-2023