СВЯЗЫВАНИЕ АНТИТЕЛАМИ СЕНСИБИЛИЗИРОВАННЫХ ЭРИТРОЦИТОВ

Готовят последовательно в двух повторностях нижеперечисленные растворы, используя для каждого из них отдельную одноразовую кювету или пробирку.

Испытуемые растворы. При необходимости доводят значение pH испытуемого раствора иммуноглобулина до 7,0.

При выполнении методики 1 объемы испытуемого образца разводят альбумин-барбиталовым буферным раствором таким образом, чтобы в 900 мкл раствора содержалось от 30 мг до 40 мг иммуноглобулина.

При выполнении методики 2 объемы испытуемого образца разводят альбумин-барбиталовым буферным таким образом, чтобы в 1200 мкл раствора содержалось от 15 мг до 30 мг иммуноглобулина.

Растворы сравнения. Готовят так же, как и испытуемые растворы с использованием СО ФЕАЭС иммуноглобулина человека для оценки функционального состояния Fc-фрагмента.

Контроль комплемента. Альбумин-барбиталовый буферный раствор используют в таком же объеме, что и испытуемый раствор.

При выполнении методики 1 к содержимому каждой кюветы или пробирки прибавляют по 100 мкл сенсибилизированных эритроцитов человека и хорошо перемешивают. Инкубируют при комнатной температуре в течение 15 мин, прибавляют 1000 мкл альбумин-барбиталового буферного раствора, отделяют клетки центрифугированием (1000 g в течение 10 мин) и удаляют 1900 мкл надосадочной жидкости. Прибавляют 1900 мкл альбумин-барбиталового буферного раствора и повторяют операцию промывки, оставляя объем 200 мкл. Полученные образцы могут храниться в герметично укупоренных кюветах (пробирках) при температуре 4 °C не более 24 ч.

При выполнении методики 2 к содержимому каждой кюветы или пробирки прибавляют по 300 мкл сенсибилизированных эритроцитов человека и хорошо перемешивают (конечная концентрация иммуноглобулина в пределах от 10 мг/мл до 20 мг/мл). Инкубируют при температуре от 15 °C до 25 °C в течение 15 мин, прибавляют 1500 мкл альбумин-барбиталового буферного раствора, отделяют клетки центрифугированием (1000 g в течение 10 мин) и удаляют надосадочную жидкость. Прибавляют 3000 мкл альбумин-барбиталового буферного раствора и повторяют всю операцию промывки четыре раза, оставляя объем 300 мкл. Полученные образцы могут храниться в герметично укупоренных кюветах (пробирках) при температуре 4 °C не более 24 ч.