ПРИГОТОВЛЕНИЕ ОБРАЗЦА

Точность результатов аминокислотного анализа требует использования очищенных образцов белков и пептидов. Компоненты буфера (например, соли, мочевина, детергенты) могут повлиять на аминокислотный анализ и должны удаляться из образца перед анализом. В методиках с использованием постколоночной дериватизацией аминокислот, компоненты буфера обычно не оказывают значимого влияния по сравнению с методиками с предколоночной дериватизацией. Желательно ограничить число операций с образцом для уменьшения потенциально возможного фонового загрязнения, улучшения открываемости анализируемого вещества и уменьшения трудозатрат. Общие технические приемы, которые используются для удаления компонентов буфера из образцов белка, включают следующие методы: (1) введение образца белка в обращенно-фазовую систему ВЭЖХ, удаление белка с помощью летучего растворителя, содержащего достаточное количество органического компонента, и высушивание образца в вакуумной центрифуге; (2) диализ с летучим буферным раствором или водой; (3) ультрафильтрационное центрифугирование для замены буфера летучим буферным раствором или водой; (4) осаждение белка из буферного раствора с использованием органического растворителя (например, ацетона); (5) гель-фильтрацию.