5-2. ДСН-ПААГ ГРАДИЕНТНЫЕ КОНТРАЦИОННЫЕ ГЕЛИ

Градиентные гели (разделяющие гели) готовят с увеличением концентрации акриламида в направлении сверху вниз. Для приготовления градиентных гелей требуется устройство для формирования градиента. Готовые градиентные гели доступны в продаже с использованием рекомендованных протоколов.

Градиентные гели обладают некоторыми преимуществами, так как они позволяют разделять белки, которые совместно мигрируют в гелях с фиксированной концентрацией акриламида. При электрофорезе белки мигрируют до тех пор, пока размер пор не препятствует их дальнейшему продвижению, и поэтому возникает эффект укладки, который приводит к появлению более резких полос. Как показано в таблице 2.1.2.30.-3, градиентные гели также позволяют разделять белки с более широким диапазоном молекулярных масс по сравнению с гелями с фиксированной концентрацией.

Таблица 2.1.2.30.-3. - Разделяющая способность гелей с градиентом концентрации.

Акриламид (%)	Диапазон молекулярных масс белка (кДа)
5 - 15	20 - 250
5 - 20	10 - 200
10 - 20	10 - 150
8 - 20	8 - 150

В таблице приведены рекомендованные составы линейного градиента, с сопоставлением диапазона концентраций акриламида к соответствующим диапазонам молекулярных масс белка. Необходимо учитывать, что могут быть приготовлены другие формы градиента (например, вогнутая) для специального применения.

Градиентные гели также применяются для определения молекулярной массы и степени чистоты белка.

5-1-4. Приготовление вертикальных прерывисто-буферных ДСН-полиакриламидных гелей 5-3. Обнаружение белков в гелях