2.1.11.15. O-АЦЕТИЛ В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Испытуемый раствор. Содержимое упаковки с испытуемым образцом количественно переносят в мерную колбу подходящего объема и доводят водой P для получения раствора полисахарида с концентрацией около 5 мг/мл. Разводят раствор так, чтобы объемы, используемые в испытании, содержали от 30 мкг до 600 мкг ацетилхолина хлорида (O-ацетил). Помещают 0,3 мл, 0,5 мл и 1,0 мл полученного раствора в двух повторностях в 6 пробирок (3 реагирующих раствора и 3 корректирующих раствора).

Растворы сравнения. 0,150 г ацетилхолина хлорида P растворяют в воде P и доводят тем же растворителем до объема 10,0 мл (основной раствор с концентрацией ацетилхолина хлорида 15 г/л). 1,0 мл основного раствора непосредственно перед использованием доводят водой P до объема 50,0 мл (рабочее разведение 1 с концентрацией ацетилхолина хлорида 300 мкг/мл). 1,0 мл основного раствора непосредственно перед использованием доводят водой P до объема 25,0 мл (рабочее разведение 2 с концентрацией ацетилхолина хлорида 600 мкг/мл). Помещают 0,1 мл и 0,4 мл рабочего разведения 1 в двух повторностях (реагирующий и корректирующий растворы) в 4 пробирки, 0,6 мл и 1,0 мл рабочего разведения 2 в двух повторностях (реагирующий и корректирующий растворы) в другие 4 пробирки.

Компенсационный раствор. Готовят, используя 1,0 мл воды P.

Объем раствора в каждой пробирке доводят водой P до 1,0 мл. В пробирки с корректирующим раствором и компенсационным раствором прибавляют по 1,0 мл раствора 412 г/л хлороводородной кислоты P и далее - по 2,0 мл раствора гидроксиламина щелочного P. Выдерживают точно 2 мин для протекания реакции и прибавляют в пробирки с реагирующим раствором по 1,0 мл раствора 412 г/л хлороводородной кислоты P. В каждую пробирку прибавляют по 1,0 мл раствора 100 г/л железа (III) хлорида P в растворе 10,3 г/л хлороводородной кислоты P, закрывают пробирки пробками и энергично встряхивают для удаления пузырьков.

Измеряют оптическую плотность (2.1.2.24) растворов при длине волны 540 нм относительно компенсационного раствора. Из значения оптической плотности каждого реагирующего раствора вычитают значение оптической плотности соответствующего корректирующего раствора.

Строят калибровочную кривую зависимости скорректированных значений оптической плотности четырех растворов сравнения от соответствующего содержания ацетилхолина хлорида и с ее помощью определяют концентрацию ацетилхолина хлорида в испытуемом растворе для каждого исследуемого объема. Рассчитывают среднее по трем значениям концентрации ацетилхолина хлорида.

1 моль ацетилхолина хлорида (181,7 г) соответствует 1 моль O-ацетила (43,05 г).

201110016-2023