СПЕЦИФИЧНОСТЬ

Специфичность представляет собой способность к однозначной оценке наличия нуклеиновой кислоты в смеси с компонентами, присутствие которых можно ожидать. Специфичность аналитических методик, основанных на амплификации нуклеиновых кислот, зависит от выбора праймеров, выбора зонда (для испытания конечного продукта) и обоснованности условий проведения испытания (как для стадии амплификации, так и стадии детектирования).

При разработке праймеров и зондов должна быть исследована их специфичность в отношении детектирования только ДНК B19V путем сравнения избранной последовательности нуклеотидов с последовательностями нуклеотидов, опубликованными в банках данных. Не должно обнаруживаться значительное сходство с последовательностями нуклеотидов, не относящимися к B19V.

Амплифицированный продукт должен однозначно идентифицироваться одним из методов, например, проведением амплификации с вложенными праймерами (гнездовая ПЦР), анализом с использованием ферментов рестрикции, секвенированием или гибридизацией со специфическим зондом.

Для проверки специфичности аналитической методики испытание должно быть проведено в отношении не менее 20 ДНК B19V-отрицательных пулов плазмы, для которых должно быть показано отсутствие реакции.

Генотипы парвовируса B19. Международный комитет по таксономии вирусов классифицирует представителей трех генотипов как штаммы человеческого парвовируса B19. Генотип 1 представляет прототип B19V, генотип 2 - вирусные последовательности нуклеотидов типа A6 и генотип 3 - V9-подобные последовательности нуклеотидов. При проведении выравнивания с использованием соответствующей последовательности нуклеотидов генотипа B19V, доступной из баз данных последовательностей нуклеиновых кислот, праймеры и зонды должны быть выбраны с таким расчетом, чтобы была возможность обнаружения и количественного определения в равной степени различных генотипов парвовируса B19. Для проверки выбранного подхода следует использовать стандартные образцы. Так как получение биологических препаратов сравнения может быть затруднено, соответствующие препараты плазмид или синтетических нуклеиновых кислот также могут служить в качестве источника охарактеризованных целевых фрагментов. Однако они не могут быть использованы для валидации процедуры экстракции.