2.1.11.19. СИАЛОВАЯ КИСЛОТА В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Испытуемый раствор. Содержимое одной или нескольких упаковок с испытуемым образцом количественно переносят в мерную колбу подходящего объема и доводят водой P для получения раствора полисахарида с концентрацией около 250 мкг/мл. Переносят с помощью шприца 4,0 мл полученного раствора в ультрафильтрационную ячейку вместимостью 10 мл, пропускающую молекулы с относительной молекулярной массой менее 50 000. Дважды промывают шприц водой P, промывную жидкость переносят в ту же ультрафильтрационную ячейку. Проводят ультрафильтрацию при постоянном перемешивании в присутствии азота P под давлением около 150 кПа. Наполняют ячейку водой P каждый раз, когда объем жидкости в ней уменьшается до 1 мл, до тех пор, пока не профильтруется 200 мл, а оставшийся в ячейке объем не будет составлять около 2 мл. Оставшуюся жидкость переносят с помощью шприца в мерную колбу вместимостью 10 мл. Ячейку трижды промывают водой P порциями по 2 мл. Промывную жидкость переносят в ту же мерную колбу и доводят водой P до объема 10,0 мл (испытуемый раствор). В две пробирки помещают по 2,0 мл испытуемого раствора.

Растворы сравнения. Используют растворы сравнения, указанные в частной фармакопейной статье.

Готовят 2 серии из трех пробирок. В пробирки каждой серии помещают 0,5 мл, 1,0 мл и 1,5 мл раствора сравнения, соответствующего типу вакцины, предназначенной для испытания, и объем в каждой пробирке доводят водой P до 2,0 мл.

Контрольный раствор. Готовят с использованием воды P по 2,0 мл в двух пробирках.

В каждую пробирку прибавляют по 5,0 мл резорцина реактива P. Пробирки нагревают при температуре 105 °C в течение 15 мин, охлаждают в холодной воде и помещают в ледяную баню. В пробирки прибавляют по 5,0 мл изоамилового спирта P, содержимое тщательно перемешивают и выдерживают в ледяной бане 15 мин. Пробирки центрифугируют и держат их в ледяной бане до проведения измерения.

Измеряют оптическую плотность (2.1.2.24) верхнего слоя при 580 нм и 450 нм, используя изоамиловый спирт P в качестве компенсационного раствора.

Для каждой длины волны рассчитывают среднее из значений оптической плотности, полученных для двух идентичных растворов. Вычитают среднее значение оптической плотности контрольного раствора из средних значений, полученных для других растворов.

Строят кривую зависимости разницы между значениями оптической плотности при 580 нм и 450 нм растворов сравнения от содержания сиаловой кислоты (N-ацетилнейраминовой кислоты) и с ее помощью определяют концентрацию сиаловой кислоты в испытуемом растворе.