2.1.11.12. БЕЛОК В ПОЛИСАХАРИДНЫХ ВАКЦИНАХ

Испытуемый раствор. Содержимое упаковки с испытуемым образцом количественно переносят в мерную колбу подходящего объема и доводят водой P для получения раствора полисахарида с концентрацией около 5 мг/мл. 1,0 мл полученного раствора помещают в стеклянную пробирку, прибавляют 0,15 мл раствора 400 г/л трихлоруксусной кислоты P, встряхивают, выдерживают 15 мин, центрифугируют 10 мин при скорости вращения 5000 об/мин и отбрасывают надосадочную жидкость. К полученному осадку прибавляют 0,4 мл раствора 4,2 г/л натрия гидроксида P.

Растворы сравнения. 0,100 г альбумина бычьего P растворяют в 100,0 мл раствора 4,2 г/л натрия гидроксида P (основной раствор с концентрацией белка 1 г/л). 1,0 мл основного раствора доводят раствором 4,2 г/л натрия гидроксида P до объема 20,0 мл (рабочее разведение 1 с концентрацией белка 50 мг/л). 1,0 мл основного раствора доводят раствором 4,2 г/л натрия гидроксида P до объема 4,0 мл (рабочее разведение 2 с концентрацией белка 250 мг/л). В 3 стеклянные пробирки помещают по 0,10 мл, 0,20 мл и 0,40 мл рабочего разведения 1, а в 3 другие стеклянные пробирки - по 0,15 мл, 0,20 мл и 0,25 мл рабочего разведения 2. Доводят объем раствора в каждой пробирке до 0,40 мл, используя раствор 4,2 г/л натрия гидроксида P.

Компенсационный раствор. Готовят, используя 0,40 мл раствора 4,2 г/л натрия гидроксида P.

В каждую пробирку прибавляют по 2,0 мл медно-тартратного раствора P3, встряхивают и выдерживают 10 мин. Далее в пробирки прибавляют по 0,2 мл смеси из равных объемов фосфорномолибденово-вольфрамового реактива P и воды P, приготовленной непосредственно перед использованием. Закрывают пробирки, перемешивают, переворачивая их, и дают отстояться в темном месте 30 мин. Синяя окраска остается стабильной 60 мин. При необходимости центрифугируют для получения прозрачных растворов.

Измеряют оптическую плотность (2.1.2.24) растворов при длине волны 760 нм относительно компенсационного раствора.

Строят калибровочную кривую зависимости значений оптической плотности шести растворов сравнения от соответствующего содержания белка и с ее помощью определяют концентрацию белка в испытуемом растворе.

201110013-2023