ЗАМЕНА МЕТОДА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ И (ИЛИ) ИСПОЛЬЗУЕМЫХ РЕАКТИВОВ
Внимание! Изменения, внесенные Решением Коллегии ЕЭК от 25.06.2024 N 75, в части дополнения общими фармакопейными статьями, вводятся в действие с 1 января 2025 года.
ЗАМЕНА МЕТОДА КОЛИЧЕСТВЕННОГО ОПРЕДЕЛЕНИЯ И (ИЛИ) ИСПОЛЬЗУЕМЫХ РЕАКТИВОВ
Количество антигенов и антител должно быть достаточным, чтобы обеспечить возможность проведения испытания на остаточные белки клетки-хозяина в течение нескольких лет. Следовательно, обеспеченность и постоянство качества реактивов должны надлежащим образом управляться на протяжении всего жизненного цикла испытания.
Для общего метода количественного определения остаточных белков клетки-хозяина, чтобы убедиться в постоянстве качества реактивов, может потребоваться повторная проверка пригодности или повторная валидация методики для каждой новой серии реактива, поскольку их качество может меняться от одной серии к другой.
Для процесс-специфичных и для платформенных методов количественных определений необходимость в новых сериях реактивов для испытания на белки клетки-хозяина может возникнуть в двух основных случаях:
- исчерпаны запасы стандартного образца белков клетки-хозяина и (или) антител; в таком случае антитела могут быть выделены из запаса замороженной сыворотки или требуется новая иммунизация;
- изменение производственного процесса может повлиять на совокупность видов белков клетки-хозяина, присутствующих в очищенных промежуточных продуктах или активной фармацевтической субстанции; реактив для испытания может не подходить для обнаружения и количественного определения модифицированных белков клетки-хозяина; поэтому изменение производственного процесса может обусловить непригодность реактивов для использования испытании.
Вновь приготовленные реактивы должны быть тщательно охарактеризованы (например, сочетанием методов двумерного электрофореза в полиакриламидном геле с натрия додецилсульфатом и вестерн-блоттинга или сочетанием методов двумерного электрофореза в полиакриламидном геле с натрия додецилсульфатом с дифференциальным гель-электрофорезом и идентификацией с помощью масс-спектрометрии). Необходимо оценить валидационные характеристики методики с использованием новых реактивов. Проверку новых реактивов рекомендуется проводить параллельно с имеющимися ранее одобренными реактивами.
Таблица 2.1.6.20.-1. - Рекомендации по оценке пригодности реактивов и оценке валидационных характеристик методики испытания в случае истощения запаса используемых реактивов или внесения изменения в производственный процесс
Реактив
Изменения в производственном процессе
антигены или стандартный образец белка (белков) клетки-хозяина
антитела к белкам клетки-хозяина
Оценка пригодности
Концентрацию белка в новой серии реактива предпочтительно определять с использованием тех же методов, что и для текущей (одобренной) серии реактива, чтобы обеспечить сопоставимость концентраций белка. С помощью подходящих методов (например, одно- или двумерный электрофорез, двумерный дифференциальный гель-электрофорез) оценивают сходство совокупностей видов белков между новой серией и текущей (одобренной) серией реактивов.
Определяют общую концентрацию белка новой серии антител. Конечную концентрацию для количественного определения необходимо установить для новой серии, чтобы получить такую же калибровочную кривую, что и для текущей (одобренной) серии реактива.
Для детектирующих антител с меткой (вторичные антитела) контролируют стехиометрию белков для подтверждения аналогичности текущей (одобренной) серии антител.
Иммунореактивность новой серии антител сравнивают качественно (визуальное сравнение) или полуколичественно (определение области охвата) с текущей (одобренной) серией подходящими методами (например, одно- или двумерный вестерн-блоттинг). Из-за изменчивости методики настоятельно рекомендуется проводить эту проверку пригодности параллельно с текущей (одобренной) серией антител.
Эффекты изменений производственного процесса, которые могут повлиять на совокупность видов белков клетки-хозяина, проверяют подходящими методами (например, одно- или двумерный электрофорез, вестерн-блоттинг, количественное определение белков клетки-хозяина).
Если изменение производственного процесса не приводит к соответствующему изменению совокупности видов белков клетки-хозяина, текущие (одобренные) реактивы подходят для нового производственного процесса.
Если изменение производственного процесса приводит к соответствующему изменению совокупности видов белков клетки-хозяина, но была подтверждена пригодность текущих (одобренных) реактивов, то текущие (одобренные) реактивы подходят для нового производственного процесса.
Если изменение производственного процесса приводит к соответствующему изменению совокупности видов белков клетки-хозяина и было показано, что текущие (одобренные) реактивы не подходят для нового производственного процесса, необходимо разработать новую методику испытания, включая пробную ферментацию в соответствии с новым производственным процессом и новую иммунизацию.
Таблица 2.1.6.20.-1. - Продолжение
Реактив
Изменения в производственном процессе
антигены или стандартный образец белка (белков) клетки-хозяина
антитела к белкам клетки-хозяина
Испытание реактивов для количественного определения остаточных белков клетки-хозяина
Новую серию реактива испытывают в сравнении с текущей (одобренной) серией реактива с использованием метода добавок при различных концентрациях в пределах диапазона применения методики.
Сравнивают сходимость калибровочных кривых, полученных с использованием новой серии реактива и текущей (одобренной) серии реактива.
Сравнивают калибровочные кривые, полученные при использовании новых и текущих (одобренных) серий антител.
Сокращенное исследование проводят с испытанием соответствующих технологических образцов (например, начиная от стадии очистки полупродукта до получения активной фармацевтической субстанции). В параллельном эксперименте новая серия антител должна обнаруживать белки клетки-хозяина на разных этапах процесса в той же концентрации или ниже, что обнаруживает текущая (одобренная) серия антител.
Сбор, полученный в пробном этапе нового процесса, проверяют на открываемость добавки с использованием текущей методики количественного определения остаточных белков клетки-хозяина.
Образцы, соответствующие стадии производственного процесса (например, начиная от стадии очистки сбора до получения активной фармацевтической субстанции), из нового и текущего процессов проверяют параллельно.
Таблица 2.1.6.20.-1. - Продолжение
Реактив
Изменения в производственном процессе
антигены или стандартный образец белка (белков) клетки-хозяина
антитела к белкам клетки-хозяина
Оценка валидационного статуса
Если проверка пригодности реактивов и испытания ИФА показали соответствие нового стандартного образца белка (белков) клетки-хозяина, текущий (одобренный) стандартный образец может быть заменен. Повторная валидация методики испытания не требуется.
Если новый стандартный образец белка (белков) клетки-хозяина значительно отличается по совокупности видов белков и (или) по рабочим характеристикам в количественном определении от текущего (одобренного) стандартного образца, требуется повторная валидация методики.
Если проверка пригодности реактивов и испытания ИФА показывают соответствие новой серии антител, текущая (одобренная) серия антител может быть заменена. Повторная валидация методики испытания не требуется.
Если новая серия антител значительно отличается по иммунореактивности вестерн-блоттинга или чувствительности иммуноанализа и (или) по рабочим характеристикам в количественном определении от текущей (одобренной) серии антител, требуется повторная валидация методики.
Если для нового производственного процесса текущая (одобренная) серия антител показывает аналогичную или более высокую иммунореактивность по сравнению с предыдущим процессом и результат количественного определения остаточных белков клетки-хозяина подтверждает приемлемую открываемость белков клетки-хозяина из пробного сбора нового процесса, а также аналогичную или более высокую чувствительность для образцов из соответствующих стадий производственного процесса, то текущая методика количественного определения и реактивы считаются подходящими для нового процесса. Повторная валидация методики испытаний не требуется.
Если ИФА обнаруживает существенные различия в открываемости добавки белков клетки-хозяина или в определяемых концентрациях белков клетки-хозяина на отдельных стадиях для текущего и нового процессов, при том, что реактивы признаны подходящими, требуется повторная валидация методики. Изменение производственного процесса может также повлиять на линейность разведения испытуемых образцов из отдельных стадий производственного процесса; если эти стадии являются критическими с точки зрения стратегии контроля содержания остаточных белков клетки-хозяина, может потребоваться повторная валидация или даже создание новых реактивов антител.
В случае существенного изменения совокупности видов белков клетки-хозяина в новом производственном процессе, которое приводит либо к несоответствию совокупности видов белков по сравнению с текущим (одобренным) стандартным образцом (антигенами), либо к снижению иммунореактивности антител, либо к значительному снижению чувствительности иммунологического анализа, готовят новые реактивы для анализа и проводят валидацию методики анализа с использованием новых реактивов.