МЕШАЮЩИЕ ФАКТОРЫ

Поскольку при проведении испытания с реактивом rFC фактор G не используется, то получения ложноположительных результатов вследствие его активации не ожидается, что требует учета при сравнении метода с другими методами количественной оценки бактериальных эндотоксинов.

Концентрацию эндотоксинов выбирают около центра калибровочной кривой стандартного образца эндотоксина.

Готовят растворы A, B, C и D в соответствии с таблицей 2.1.6.12.-1. Выполняют испытание не менее чем на двух повторностях этих растворов в соответствии с инструкцией производителя набора реактивов для испытания (объемы испытуемого раствора и смеси реактивов, объемное соотношение испытуемого раствора и смеси реактивов, время инкубации и др.).

Результаты испытания считают достоверными, если выполняются следующие условия:

- абсолютное значение коэффициента корреляции калибровочной кривой стандартного образца эндотоксина не менее 0,980;

- результат, полученный с раствором D, не превышает предельного значения, указанного в инструкции производителя набора реактивов, или меньше предела обнаружения эндотоксина для используемого реактива rFC.

Рассчитывают среднее значение открываемости добавленного эндотоксина, вычитая из среднего значения концентрации эндотоксина в растворе B (содержащего добавленный эндотоксин, таблица 2.1.6.12.-1) среднее значение концентрации эндотоксина в растворе A (если эндотоксин обнаружен, таблица 2.1.6.12.-1).

Таблица 2.1.6.12.-1. - Приготовление растворов для испытания

Примечание.

Раствор A - испытуемый раствор, разведение которого не превышает МДР.

Раствор B (положительный контроль) - испытуемый раствор в таком же разведении, как и раствор A, содержащий добавленный эндотоксин в концентрации, близкой к центру калибровочной кривой стандартного образца эндотоксина.

Раствор C - раствор стандартного образца эндотоксина в концентрациях, используемых при валидации методики, как описано в разделе Критерии приемлемости калибровочной кривой стандартного образца эндотоксина данной общей фармакопейной статьи.

Раствор D (отрицательный контроль) - вода для испытания на бактериальные эндотоксины.

Считают, что испытуемый раствор не содержит мешающих факторов, если в условиях испытания измеренная концентрация эндотоксина, добавленного в испытуемый раствор, находится в пределах 50 - 200% от известной концентрации добавленного эндотоксина после вычитания любого эндотоксина, обнаруженного в растворе без добавления эндотоксина.

Если значение открываемости эндотоксина выходит за пределы указанного диапазона, считают, что испытуемый раствор содержит мешающие факторы. Повторяют испытание, используя большее разведение, не превышающее МДР. Кроме того, влияние испытуемого раствора (в разведении, не превышающем МДР) можно устранить обработкой с помощью валидированных методов, таких как фильтрация, нейтрализация, диализ, термическая обработка или этапы связывания, специфичные для эндотоксина (обогащение эндотоксина из испытуемого раствора до обнаружения при отсутствии мешающей матрицы). Для установления эффективности устранения мешающего влияния выбранным методом обработки без потери эндотоксинов повторяют испытание на мешающие факторы, добавляя к испытуемому раствору стандартный раствор эндотоксина, с последующей его обработкой выбранным методом.