1. ИСПОЛЬЗУЕМЫЕ ТЕСТ-ШТАММЫ МИКРООРГАНИЗМОВ И РАБОТА С НИМИ

Эффективность консервантов лекарственных препаратов определяют в отношении определенных видов бактерий, дрожжевых и плесневых грибов. При испытании применяют указанные ниже тест-штаммы (табл. 2.3.1.1.-1).

Таблица 2.3.1.1.-1. - Тест-штаммы микроорганизмов

Примечания.

1. Кроме перечисленных тест-штаммов можно использовать и другие микроорганизмы, которые должны быть типичными по культурально-морфологическим, тинкториальным и биохимическим свойствам.

2. Набор тест-штаммов микроорганизмов может быть уменьшен или увеличен в зависимости от способа применения, состава или возможных микроорганизмов-контаминантов испытуемого лекарственного препарата. Например, для испытания лекарственных препаратов для приема внутрь, содержащих высокие концентрации сахара, можно использовать Zygosaccharomyces rouxii (NCYC 381; IP 2021.92), для препаратов, в состав которых входит бензалкония хлорид, целесообразно включать Burkholderia cepacia (ATCC 25416, ATCC 177759) и др.

Все тест-штаммы микроорганизмов, полученные из официальных коллекций с сертификатом производителя в ампулах, на дисках или в другом виде следует восстанавливать способами, описанными в прилагаемых к тест-штаммам инструкциях или в соответствии со статьей 2.1.6.6.

Культуры бактерий и грибов пересевают, делая не более 5 пассажей. Условия культивирования тест-штаммов для приготовления инокулята представлены в табл. 2.3.1.1.-2. Используемые питательные среды представлены в статье 2.1.6.6.

Таблица 2.3.1.1.-2. - Условия культивирования тест-штаммов микроорганизмов для приготовления инокулята

Примечание. Допускается использование альтернативных жидких и агаризованных питательных сред

Контроль ростовых свойств используемых питательных сред проводят в соответствии со статьей 2.1.6.6.

При приготовлении инокулята суточные культуры тест-штаммов бактерий и C. albicans смывают с поверхности скошенного агара стерильным 0,9% раствором натрия хлорида. Концентрацию клеток бактерий доводят до 10⁹ КОЕ/мл, а C. albicans - до 10⁷ КОЕ/мл, используя стандартный образец мутности или разнообразные инструментальные методы, в том числе турбидиметрический.

В случае использования жидких питательных сред для культивирования тест-штаммов, клетки бактерий и C. albicans выделяют центрифугированием, промывают и ресуспендируют стерильным 0,9% раствором натрия хлорида до концентрации 1·10⁷ - 1·10⁸ КОЕ/мл.

Для смыва конидий A. brasiliensis используют стерильный 0,9% раствор натрия хлорида, содержащий 0,05% полисорбата-80. Количество конидий A. brasiliensis в 1 мл смыва определяют с помощью камеры Горяева или чашечным агаровым методом. Полученную взвесь разводят до концентрации 10⁷ конидий в 1 мл.

Стандартизованные суспензии всех тест-штаммов микроорганизмов разводят до концентрации 10⁷ - 10⁸ КОЕ/мл.

Из каждой суспензии отбирают подходящий образец и определяют число колониеобразующих единиц в 1 мл каждой суспензии методом посева на чашки или методом мембранной фильтрации (2.1.6.6). Полученное значение служит для определения числа жизнеспособных микроорганизмов в инокуляте и исходного числа микроорганизмов при проведении испытания. Инокулят следует использовать тотчас после приготовления.