6. РЕКОМЕНДУЕМЫЕ ПИТАТЕЛЬНЫЕ СРЕДЫ И РАСТВОРЫ

Для испытания используют готовые к использованию или приготовленные питательные среды или питательные среды, приготовленные в лаборатории.

При приготовлении питательных сред в лаборатории необходимо строго придерживаться приведенной рецептуры, а при использовании коммерческих сухих питательных сред - инструкции предприятия-изготовителя. Входящие в состав питательных сред индикаторы и красители добавляют в виде растворов определенной концентрации. Необходимое значение pH питательной среды устанавливают при температуре (22,5 +/- 2,5) °C.

Если нет других указаний в нормативном документе по качеству, среды стерилизуют в автоклаве при температуре 121 °C в течение 15 мин, при условии валидации процесса стерилизации.

	Фосфатный буферный раствор с натрия хлоридом и пептоном (pH 7,0):
-	Калия фосфат однозамещенный	3,6 г
-	Натрия фосфат двузамещенный	7,2 г
-	Натрия хлорид	4,3 г
-	Пептон (мясной или казеиновый)	1,0 г
-	Вода очищенная	1000,0 мл

	Нейтрализующая жидкость
-	Полисорбат-80	30,0 г
-	Лецитин (яичный или соевый)	3,0 г
-	Гистидина гидрохлорид	1,0 г
-	Пептон (мясной или казеиновый)	1,0 г
-	Натрия хлорид	2,5 г
-	Калия фосфат однозамещенный	4,3 г
-	Натрия фосфат двузамещенный	7,2 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 7,6 +/- 0,2.	1000,0 мл

	Полужидкий агар для хранения тест-микроорганизмов
-	Панкреатический гидролизат казеина	8,0 г
-	Натрия хлорид	5,0 г
-	Агар микробиологический	5,0 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 7,0 +/- 0,2.	1000,0 мл

	Соево-казеиновый агар (Casein Soya Bean Digest agar)
-	Панкреатический гидролизат казеина	15,0 г
-	Папаиновый гидролизат бобов сои	5,0 г
-	Натрия хлорид	5,0 г

	Агар микробиологический 15,0 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 7,3 +/- 0,2.	1000,0 мл

Альтернативная среда для выращивания аэробных бактерий - среда N 1 для контроля микробной загрязненности, сухая; мясопептонный агар (МПА); агаризованные питательные среды на основе гидролизата рыбной муки (ГРМ).

	Бульон Сабуро (Sabouraud Broth)
-	Пептон (мясной)	5,0 г
-	Пептон (казеиновый)	5,0 г
-	Глюкозы моногидрат	20,0 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 5,6 +/- 0,2.	1000,0 мл

	Агар Сабуро с глюкозой (Sabouraud 4% Glucose Agar)
-	Пептон (мясной или казеиновый)	10,0 г
-	Глюкозы моногидрат	40,0 г
-	Агар бактериологический	15,0 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 5,6 +/- 0,2.	1000,0 мл

Альтернативная среда для выращивания дрожжевых и плесневых грибов - среда N 2 (агар Сабуро с глюкозой) для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

Для повышения селективности среды с целью предотвращения роста бактерий перед стерилизацией добавляют 50 мг хлорамфеникола (левомицетина) на 1 л среды или перед розливом в чашки Петри в расплавленную среду вносят 0,1 г натриевой соли бензилпенициллина и 0,1 г тетрациклина на 1 л среды в виде стерильных растворов.

	Бульон Мосселя для обогащения энтеробактерий (Enterobacteria Enrichment Broth - Mossel)
-	Панкреатический гидролизат желатина	10,0 г
-	Глюкозы моногидрат	5,0 г
-	Бычья желчь сухая	20,0 г
-	Калия фосфат однозамещенный	2,0 г
-	Натрия фосфат двузамещенный	8,0 г
-	Бриллиантовый зеленый	0,015 г
-	Вода очищенная pH 7,2 +/- 0,2.	1000,0 мл

Среду нагревают при температуре 100 °C в течение 30 мин с последующим быстрым охлаждением.

Альтернативная среда для выращивания аэробных бактерий - среда N 3 для контроля микробной загрязненности, сухая; различных производителей.

	Агар Мосселя (Crystal violet, Neutral Red, Bile Agar with Glucose)
-	Дрожжевой экстракт	3,0 г
-	Панкреатический гидролизат казеина	7,0 г
-	Соли желчи	1,5 г
-	Лактозы моногидрат	10,0 г
-	Натрия хлорида	5,0 г
-	Глюкозы моногидрат	10,0 г
-	Агар микробиологический	15,0 г
-	Нейтральный красный	0,03 г
-	Кристаллический фиолетовый	0,002 г
-	Вода очищенная pH 7,4 +/- 0,2.	1000,0 мл

Нагревают до кипения. Среду не автоклавируют.

Альтернативная среда для выделения энтеробактерий - среда N 4 (Эндо) для контроля микробной загрязненности, сухая; различных производителей.

	Бульон Мак-Конки (MacConkeyBroth)
-	Панкреатический гидролизат желатина	20,0 г
-	Лактозы моногидрат	10,0 г
-	Бычья желчь сухая	5,0 г
-	Бромкрезоловый пурпурный	0,01 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 7,3 +/- 0,2.	1000,0 мл

Альтернативная среда обогащения для энтеробактерий - среда N 3 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

	Агар Мак-Конки (MacConkeyAgar)
-	Панкреатический гидролизат желатина	17,0 г
-	Пептон (мясной или казеиновый)	3,0 г
-	Лактозы моногидрат	10,0 г
-	Натрия хлорид	5,0 г
-	Соли желчи	1,5 г
-	Агар микробиологический	13,5 г
-	Нейтральный красный	0,03 г
-	Кристаллический фиолетовый	0,001 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 7,1 +/- 0,2.	1000,0 мл

Перед стерилизацией кипятят 1 мин, постоянно встряхивая.

Альтернативная среда для выделения энтеробактерий - среда N 4 (Эндо) для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

	Накопительная среда для бактерий рода Salmonella (бульон Раппопорта-Вассилиадиса)
-	Соевый пептон	4,5 г
-	Магния хлорид шестиводный	29,0 г
-	Натрия хлорид	7,2 г
-	Калий фосфорнокислый двузамещенный	0,18 г
-	Калий фосфорнокислый однозамещенный	1,26 г
-	Малахитовый зеленый	0,036 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 5,2 +/- 0,2.	1000,0 мл

Среду автоклавируют в течение 15 мин при температуре 115 °C.

	Ксилоза, лизин, дезоксихолат агар (Xylose, Lisine, DeoxycholateAgar)
-	Ксилоза	3,5 г
-	L-лизин	5,0 г
-	Лактозы моногидрат	7,5 г
-	Сахароза	7,5 г
-	Натрия хлорид	5,0 г
-	Дрожжевой экстракт	3,0 г
-	Феноловый красный	0,08 г
-	Агар микробиологический	13,5 г
-	Натрия дезоксихолат	2,5 г
-	Натрия тиосульфат	6,8 г
-	Железа аммоний цитрат	0,8 г
-	Вода очищенная pH 7,4 +/- 0,2.	1000,0 мл

Доводят до кипения, охлаждают до температуры 50 °C и разливают в чашки Петри. Среду не автоклавируют.

	Висмут-сульфитный агар (BismuthSulfiteagar)
-	Мясной экстракт	5,0 г
-	Мясной пептон	10,0 г
-	Глюкозы моногидрат	5,0 г
-	Натрия фосфат двузамещенный	4,0 г
-	Железа сульфат	0,3 г
-	Бриллиантовый зеленый	0,025 г
-	Висмута сульфит	0,8 г
-	Агар микробиологический	15,0 г
-	Вода очищенная pH 7,6 +/- 0,2.	1000,0 мл

Среду не автоклавируют. Приготовленная среда непрозрачна, зеленого цвета.

Альтернативная среда для выделения сальмонелл - среда N 5 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

	Соево-казеиновый бульон (Casein Soya Bean Digest Broth)
-	Панкреатический гидролизат казеина	17,0 г
-	Папаиновый гидролизат бобов сои	3,0 г
-	Натрия хлорид	5,0 г
-	Калия фосфат двузамещенный	2,5 г
-	Глюкозы моногидрат	2,5 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 7,3 +/- 0,2.	1000,0 мл

Альтернативная среда для выращивания бактерий - среда N 8 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

	Цетримидный агар (Cetrimide Agar)
-	Панкреатический гидролизат желатина	20,0 г
-	Магния хлорид	1,4 г
-	Калия сульфат двузамещенный	10,0 г
-	Цетримид (цетилпиридиния бромид)	0,3 г
-	Агар микробиологический	13,6 г
-	Глицерин	10,0 мл
-	Вода очищенная pH после стерилизации 7,2 +/- 0,2.	1000,0 мл

Альтернативная среда для выделения синегнойной палочки - ЦПХ (среда N 16) - агар для выделения синегнойной палочки, сухая.

	ЦПХ агар (среда N 16)
-	Пептон сухой ферментативный	20,0 г
-	Калий сернокислый	7,6 г
-	Магний сернокислый семиводный	2,4 г
-	Сода кальцинированная	1,0 г
-	Фенозан-кислота	0,2 г
-	ЦПХ (N-цетилпиридиний хлористый 1-водный)	0,3 г
-	Агар микробиологический	8,0 г
-	Вода очищенная pH 7,2 +/- 0,2.	1000,0 мл

Среду не автоклавируют.

	Агар для выявления пиоцианина Pseudomonas (Pseudomonas Agar Medium for Detection of Pyocyanin)
-	Панкреатический гидролизат желатина	20,0 г
-	Магния хлорид безводный	1,4 г
-	Калия сульфат безводный	10,0 г
-	Агар микробиологический	13,6 г
-	Глицерин	10,0 мл
-	Вода очищенная pH после стерилизации 7,2 +/- 0,2.	1000,0 мл

Все компоненты, кроме глицерина, растворяют в воде. Нагревают при перемешивании и кипятят 1 мин. Добавляют глицерин и стерилизуют.

Альтернативная среда для идентификации синегнойной палочки - среда N 9 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

	Маннитно-солевой агар
-	Пептон ферментативный сухой	10,0 г
-	D-Маннит	10,0 г
-	Натрия хлорид	75,0 г
-	Агар микробиологический	15,0 г
-	Феноловый красный	0,025 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 7,4 +/- 0,2.	1000,0 мл

Альтернативная среда для выделения и идентификации золотистого стафилококка - среда N 10 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

	Трехсахарный агар с солями железа (TripleSugar-Iron-Agar)
-	Мясной экстракт	3,0 г
-	Дрожжевой экстракт	3,0 г
-	Пептон (казеиновый или мясной)	20,0 г
-	Натрия хлорида	5,0 г
-	Лактозы моногидрат	10,0 г
-	Сахароза	10,0 г
-	Глюкозы моногидрат	1,0 г
-	Железо-аммоний цитрат	0,3 г
-	Натрия тиосульфат	0,3 г
-	Феноловый красный	0,025 г
-	Агар микробиологический	12,0 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 7,4 +/- 0,2.	1000,0 мл

Среду разливают в пробирки, заполняя их на 1/3 объема. После стерилизации среду оставляют для застывания таким образом, чтобы образовались столбик и скошенная часть над ним.

Альтернативная среда для идентификации сальмонелл - среда N 13 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

	Цитратный агар Симмонса
-	Натрия хлорида	5,0 г
-	Магния сульфат	0,2 г
-	Аммония дигидрофосфат	1,0 г
-	Калия гидрофосфат	1,0 г
-	Натрия цитрат	3,0 г
-	Бромтимоловый синий	0,08 г
-	Агар микробиологический	20,0 г
-	Вода очищенная pH после стерилизации 7,2 +/- 0,2.	1000,0 мл

Альтернативная среда для идентификации E. coli - среда N 14 для контроля микробной загрязненности, сухая, различных производителей.

201060008-2019

5-5. Хранение питательных сред 2.1.6.8. Бактериальные эндотоксины (201060008-2019)