ДЕТЕКТИРОВАНИЕ СИГНАЛА

Когда частица проходит через пучок света, она рассеивает часть света во всех направлениях. Флуоресцентные красители, добавленные к частице, испускают свой собственный свет (флуоресценцию), которая также излучается во всех направлениях. Таким образом, генерируются два типа сигнала: рассеяние света и эмиссия флуоресценции.

Световые датчики прибора фокусируют часть этого рассеянного света и флуоресценции и преобразуют в электрические импульсы пропорционально количеству собранного света.

Светорассеяние

Измеряют 2 параметра:

- прямое рассеяние;

- боковое рассеяние, под углом 90° к направлению пучка света.

Прямое светорассеяние коррелирует с объемом клетки, в то время как боковое светорассеяние, связанное с такими параметрами, как форма ядра, количество и тип цитоплазматических гранул или шероховатость мембран, коррелирует с морфологическим строением клетки. С возрастанием сложности клеточной структуры интенсивность бокового светорассеяния также возрастает.

Сигналы светорассеяния, являющиеся функцией морфологических характеристик клеток и определяющиеся как базовые параметры, при анализе с помощью проточной цитометрии будут генерироваться всегда.

Флуоресценция

При прохождении частиц через лазерный луч они будут испускать определенный флуоресцентный свет, в зависимости от типа и количества источников света. Излучение флуоресцентных сигналов происходит благодаря флуоресцентным красителям, естественно находящимся в клетках (например, коферменты, хлорофилл, пигменты морской водоросли), и (или) флуоресцентным зондам, использованным для маркировки клеток для определения специфичных характеристик (например, флуоресцирующие антитела, красители нуклеиновых кислот, pH-метки и кальций-зависимые метки, флуоресцирующие белки). Каждая флуоресцентная метка характеризуется индивидуальным спектром возбуждения и спектром эмиссии, ее выбирают в зависимости от природы источника возбуждения, системы обнаружения и специфической цели анализа. Оптические фильтры должны соответствовать используемым флуорофором.