2.1.8.21. Определение посторонних масел в жирных маслах методом тонкослойной хроматографии (201080021-2022)

Испытание проводят методом тонкослойной хроматографии в соответствии с общей фармацевтической статьей 2.1.2.26. Тонкослойная хроматография с использованием в качестве тонкого слоя кизельгура G P.

Пластинку пропитывают, поместив в камеру, содержащую смесь парафин жидкий P - петролейный эфир P (10:90, об/об) в таком количестве, чтобы нижний край пластинки был погружен в жидкость на 5 мм. Когда смесь для пропитывания поднимется не менее чем на 12 см от нижнего края пластинки, ее вынимают из камеры и дают растворителю испариться в течение 5 мин. Последующее хроматографирование проводят в том же направлении, что и подготовка пластинки к испытанию.

Приготовление смеси жирных кислот. К 2 г масла прибавляют 30 мл 0,5 M раствора калия гидроксида спиртового и нагревают с обратным холодильником в течение 45 мин. Добавляют 50 мл воды P, охлаждают, переносят в делительную воронку и экстрагируют тремя порциями эфира P по 50 мл. Эфирные слои отбрасывают, водный слой подкисляют хлороводородной кислотой P и вновь встряхивают с тремя порциями эфира P по 50 мл. Эфирные экстракты объединяют и встряхивают с тремя порциями воды P по 10 мл, отбрасывая промывные воды. Объединенные эфирные экстракты сушат над натрия сульфатом безводным P и фильтруют. Затем эфир выпаривают на водяной бане, а из полученного остатка готовят испытуемый раствор. Жирные кислоты также можно извлечь из щелочного раствора, полученного при определении неомыляемых веществ.

Испытуемый раствор. 40 мг смеси жирных кислот, полученной из испытуемого образца масла, растворяют в 4 мл хлороформа P.

Раствор сравнения. 40 мг смеси жирных кислот, полученной из смеси 19 объемов кукурузного масла P и 1 объема рапсового масла P, растворяют в 4 мл хлороформа P.

На линию старта хроматографической пластинки наносят по 3 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения. Помещают пластинку в камеру с системой растворителей: вода P - кислота уксусная ледяная P (10:90 об/об). Когда фронт растворителей пройдет 8 см от линии старта, пластинку вынимают из камеры, сушат при температуре 110 °C в течение 10 мин и оставляют до охлаждения. Затем, при отсутствии других указаний в частной фармакопейной статье, пластинку помещают в закрытую с плотно подогнанной крышкой хроматографическую камеру, предварительно насыщенную парами йода (на дно камеры в выпарительной чашке помещают йод P). Через некоторое время проявляются коричневые или желтовато-коричневые пятна. Пластинку вынимают из камеры и оставляют на несколько минут до исчезновения коричневого фона и опрыскивают раствором крахмала P. Появляются синие пятна (зона адсорбции), которые могут приобретать коричневую окраску при высушивании и вновь становятся синими после опрыскивания водой P.

На хроматограмме испытуемого раствора всегда должны обнаруживаться пятна с R_F около 0,5 (олеиновая кислота) и пятно с R_F около 0,65 (линолевая кислота), соответствующие пятнам на хроматограмме раствора сравнения. На хроматограмме испытуемого раствора некоторых масел может обнаруживаться пятно с R_F около 0,75 (линоленовая кислота). При сравнении пятен на хроматограммах испытуемого раствора и раствора сравнения на хроматограмме испытуемого раствора не должно обнаруживаться пятно с R_F около 0,25 (эруковая кислота).

201080022-2022