АНАЛИЗ ДАННЫХ

Клеточная суспензия для испытания может содержать различные виды объектов, некоторые из которых нежелательны (такие, как нежизнеспособные клетки, фрагменты клеток или макроагрегаты) или просто не являются целью анализа (например, гранулоциты при изучении лимфоцитов). Это зависит от типа образца (цельная кровь, костный мозг, клеточные культуры, биологические жидкости, клеточные суспензии из плотных тканей) и процедуры обработки (например, методы окрашивания, лизиса (эритроцитов), фиксации, криоконсервирования, размораживания, депарафинирования).

Как следствие, не все сигналы, генерируемые во время анализа, принадлежат изучаемым клеткам. Для исключения нежелательных и несоответствующих сигналов применяют два подхода.

Первый подход, который применяют в процессе накопления данных, представляет собой установление шумового порога для одного (или более) существенного параметра (параметров). Данный подход регулирует включение в анализ только клеток, интенсивность сигнала которых выше, чем предопределенное дискриминирующее (пороговое) значение для данного параметра. Параметр прямого светорассеяния чаще всего используют в качестве дискриминатора (фактора разделения) из-за его высокоинтенсивного сигнала с низким уровнем интерференции.

Второй подход, который применяют при анализе данных, заключается в процедуре гейтирования, ограничивая анализ только сигналами от тех популяций клеток, которые удовлетворяют определенным морфологическим и экспрессионным (по флуоресценции) профилям. Обычно используют 2 типа гейтирования. Первый тип основан на морфологии клеток. Клеточные популяции идентифицируют по их морфологическим характеристикам (определяемым с помощью прямого светорассеяния и бокового светорассеяния). Область гейтирования определяет границы представляющей интерес популяции (например, лимфоциты, жизнеспособные клетки), после чего графики флуоресценции отображаются только для выбранной области. Второй тип селекции сигнала основан на флуоресценции. Интересующую клеточную популяцию идентифицируют на основании интенсивности экспрессии антигена или красителя, затем определяют область гейтирования. Затем в рамках выбранной области строят графики флуоресценции. Соответствующее программное обеспечение позволяет создавать множественные области гейтирования, используя последовательный логический порядок. Это особенно информативно при изучении редких популяций клеток или при сортировке клеток.