МЕТОДИКА

Испытуемый образец восстанавливают или размораживают согласно инструкции по медицинскому применению. Готовят с использованием воды P не менее трех отдельных разведений до концентраций в диапазоне 0,050 - 0,200 МЕ/мл в двух повторностях. Аналогичным образом готовят разведения восстановленного стандартного образца.

Стадия 1. Смешивают по 0,025 мл каждого разведения с 0,050 мл активатора протеина C, предварительно нагретых до температуры 37 °C, и инкубируют при той же температуре точно 10 мин. Для каждого разведения проводят контрольный опыт, используя воду P вместо активатора протеина C.

Стадия 2. К каждой смеси прибавляют по 0,150 мл разбавленного хромогенного субстрата, предварительно нагретого до температуры 37 °C, и инкубируют при той же температуре точно 10 мин. При необходимости время инкубации должно быть скорректировано таким образом, чтобы получить линейную зависимость образования хромофора от времени. Останавливают реакцию добавлением 0,050 мл 50% (об/об) раствора уксусной кислоты ледяной P.

При расщеплении хромогенного субстрата под действием APC образуется окрашенный продукт в количестве, пропорциональном концентрации протеина C в образце. Измеряют оптическую плотность при длине волны 405 нм (2.1.2.24). Значение оптической плотности контрольного опыта вычитают из значения оптической плотности испытуемого образца.

Проверяют достоверность результатов испытания и рассчитывают активность протеина C в испытуемом образце с использованием общепринятых статистических методов (2.3.12.0).