МЕТОДОЛОГИЯ АМИНОКИСЛОТНОГО АНАЛИЗА: ОБЩИЕ ПРИНЦИПЫ

Существует множество способов аминокислотного анализа. Выбор конкретного способа зачастую определяется требуемой чувствительностью количественного определения. В целом около половины применяемых способов аминокислотного анализа основаны на разделении свободных аминокислот посредством ионообменной хроматографии с последующей постколоночной дериватизацией (например, с нингидрином или o-фталевым альдегидом). Методы постколоночной дериватизации могут быть использованы для образцов, содержащих небольшое количество буферных компонентов (таких как соли и мочевина) и обычно требует от 5 мкг до 10 мкг испытуемого образца белка для проведения одного анализа. Остальные методы аминокислотного анализа обычно включают предколоночную дериватизацию свободных аминокислот (например, фенилизотиоцианатом; 6-аминохинолил-N-гидроксисукцинимидилкарбаматом или o-фталевым альдегидом; (диметиламино)азобензолсульфонилхлоридом; 9-фторенилметилхлорформиатом; 7-фтор-4-нитробензо-2-окса-1,3-диазолом) с последующим обращенно-фазовым ВЭЖХ анализом. Метод предколоночной дериватизации отличается высокой чувствительностью (обычно требуется от 0,5 мкг до 1,0 мкг испытуемого образца белка для проведения одного анализа), однако на него могут оказывать влияние компоненты солевого буфера, содержащиеся в испытуемом образце. Предколоночная дериватизация может привести к образованию производных одной аминокислоты, что приводит к усложнению интерпретации результатов.

Для количественного аминокислотного анализа могут быть использованы приведенные ниже методы. Приборы и реактивы для проведения этих испытаний коммерчески доступны. Кроме того, многие из этих методов имеют модификации с различным приготовлением реактивов, проведением химических реакций, различными хроматографическими системами и так далее. Специфические параметры могут отличаться в зависимости от конкретного оборудования и методики выполнения анализа. Многие лаборатории используют несколько методик аминокислотного анализа, так как каждая из них имеет свои преимущества. В каждой из этих методик аналоговый сигнал обнаруживается с помощью системы сбора данных, а площади пиков используются для количественного определения.