2.1.11.2. КОЛИЧЕСТВЕННОЕ ОПРЕДЕЛЕНИЕ ПРОТЕИНА S ЧЕЛОВЕКА

В общей фармакопейной статье приведен пример методики количественного определения протеина S человека (протеин S) клоттинговым методом.

Протеин S представляет собой витамин K-зависимый белок плазмы, который действует как кофактор активированного протеина C человека (активированный протеин C (activated protein C, APC)). Активность протеина S может быть определена по реакции свертывания крови, которая чувствительна к способности протеина S ускорять инактивацию фактора свертывания крови человека Va (фактор Va) под действием APC. Испытание заключается в прибавлении протеина S к смеси реактивов, содержащей APC, фактор Va и плазму крови человека, дефицитную по протеину S. Увеличение времени свертывания пропорционально концентрации протеина S в образце. Методики, в которых APC добавляется непосредственно как реактив, более предпочтительны по сравнению с теми, в которых APC генерируется во время проведения испытания путем добавления специфического активатора протеина C, выделенного из яда змеи. Активация свертывания инициируется добавлением активирующего реактива, такого как тромбопластин или активированный фактор свертывания крови человека X (фактор Xa), вместе с фосфолипидами и кальция хлоридом. Во время испытания фактор Va генерируется из фактора V в плазме крови человека, дефицитной по протеину S, с последующей активацией свертывания. Процедура испытания должна обеспечивать, чтобы единственным фактором, ограничивающим реакцию свертывания, являлся протеин S.

Количественное определение протеина S основано на его способности увеличивать время свертывания, и оценивается путем сравнения активности испытуемого образца с активностью стандартного образца протеина S, выраженной в международных единицах.

За международную единицу принимают активность определенного количества международного стандартного образца протеина S человека, устанавливаемую Всемирной организацией здравоохранения.

Реактивы для испытания могут быть приобретены по отдельности или в виде коммерческих наборов. Методики и реактивы могут отличаться в разных наборах, поэтому следует придерживаться инструкции производителя набора.