2.1.2.24. Абсорбционная спектрофотометрия в ультрафиолетовой и видимой областях (201020024-2019)

Определение оптической плотности. Оптическая плотность (A) раствора представляет собой десятичный логарифм обратной величины пропускания (T) для монохроматического излучения и выражается соотношением:

,

где:

I₀ - интенсивность падающего монохроматического излучения;

I - интенсивность прошедшего монохроматического излучения.

В отсутствие других физико-химических факторов измеренная оптическая плотность (A) пропорциональна длине пути (b), через который проходит излучение, и концентрации (c) вещества в растворе в соответствии с уравнением:

где: - молярный коэффициент поглощения;

b - длина оптического пути, в сантиметрах;

c - концентрация вещества в растворе, в моль на литр.

Величина представляет собой удельный показатель поглощения, то есть оптическую плотность раствора вещества с концентрацией 10 г/л в кювете с толщиной слоя 1 см:

При отсутствии других указаний в частной фармакопейной статье измерение оптической плотности проводят при указанной длине волны с использованием кюветы 1 см. При отсутствии других указаний в частной фармакопейной статье измерение проводят по сравнению с тем же растворителем или той же смесью растворителей, в которой растворено вещество. Оптическая плотность растворителя, измеренная против воздуха при указанной длине волны, не должна превышать 0,4 и желательно, чтобы она была менее 0,2. Спектр поглощения представляют таким образом, чтобы оптическая плотность или ее некоторая функция были приведены по оси ординат, а длина волны или некоторая функция от длины волны - по оси абсцисс.

Если в частной фармакопейной статье приводят только одно значение для положения максимума поглощения, то это означает, что полученное значение максимума не должно отличаться от указанного более чем на +/- 2 нм.

Прибор. Спектрофотометры, предназначенные для измерений в ультрафиолетовой и видимой областях спектра, состоят из оптической системы, выделяющей монохроматическое излучение в области от 200 нм до 800 нм, и устройства для измерения оптической плотности.

Проверка шкалы длин волн. Для проверки шкалы длин волн используют линии водородной или дейтериевой разрядной лампы или линии паров ртути, а также максимумы поглощения гольмия перхлората раствор P, которые представлены в таблице 2.2.2.24.-1. Допустимое отклонение составляет +/- 1 нм для ультрафиолетового и +/- 3 нм для видимого диапазонов. Также могут быть использованы и другие сертифицированные стандартные образцы.

Таблица 2.1.2.24.-1. Максимумы поглощения (или испускания) для проверки шкалы длин волн

Проверка шкалы оптической плотности. Проверяют значения оптических плотностей, используя подходящие фильтры или калия дихромата раствор P при длинах волн, указанных в таблице 2.1.2.24.-2. В таблице 2.1.2.24.-2 приведены точные значения удельного показателя поглощения и его допустимые пределы для каждой длины волны. Данные таблицы основаны на допустимой погрешности при измерении поглощения +/- 0,01.

Таблица 2.1.2.24.-2. Значения удельного показателя поглощения и его допустимые пределы

Для проверки шкалы оптических плотностей используют растворы калия дихромата P, который предварительно сушат при температуре 130 °C до постоянной массы. Для проверки шкалы оптических плотностей при длинах волн 235 нм, 257 нм, 313 нм и 350 нм растворяют (57,0 - 63,0) мг калия дихромата P в 0,005 M растворе серной кислоты и доводят до объема 1000,0 мл этим же растворителем. Для проверки шкалы оптических плотностей при длине волны 430 нм растворяют (57,0 - 63,0) мг калия дихромата P в 0,005 M растворе серной кислоты и доводят до объема 100,0 мл этим же растворителем. Также могут быть использованы и другие сертифицированные стандартные образцы.

Предельный уровень рассеянного света. Рассеянный свет может быть определен при данной длине волны с использованием соответствующих фильтров или растворов. Например, оптическая плотность раствора 12 г/л калия хлорида P в кювете с толщиной слоя 1 см резко возрастает между 220 нм и 200 нм и имеет значение более 2,0 при 198 нм при использовании воды в качестве компенсационного раствора. Также могут быть использованы и другие сертифицированные стандартные образцы.

Разрешающая способность (для качественного анализа). Если указано в частной фармакопейной статье, то определяют разрешающую способность спектрофотометра следующим образом. Записывают спектр 0,02% (об/об) раствора толуола P в гексане P. Минимально допустимое значение отношения оптической плотности в максимуме поглощения при 269 нм к оптической плотности в минимуме поглощения при 266 нм указывают в частной фармакопейной статье. Также могут быть использованы и другие сертифицированные стандартные образцы.

Ширина спектральной щели (для количественного анализа). В случае использования спектрофотометра с изменяемой шириной спектральной щели при выбранной длине волны возможны погрешности, связанные с шириной этой щели. Для их исключения ширина спектральной щели должна быть малой по сравнению с полушириной полосы поглощения и в то же время должна быть максимально велика для получения высокого уровня I₀. Таким образом, ширина щели должна быть такой, чтобы дальнейшее ее уменьшение не изменяло величину измеряемой оптической плотности.

Кюветы. Допустимые вариации в толщине слоя используемых кювет должны быть не более +/- 0,005 см. Кюветы, предназначенные для испытуемого и компенсационного растворов, должны иметь одинаковое пропускание (или оптическую плотность) при заполнении одним и тем же растворителем. В противном случае это различие следует учитывать.

Чистка и обращение с кюветами должны быть аккуратными.