ИСПЫТАНИЯ НА БЕЗОПАСНОСТЬ

Специфическая токсичность

Метод обнаружения остаточных токсичных компонентов in vitro должен быть специфичным и более чувствительным, чем существующий метод in vivo. По возможности следует использовать полнофункциональную систему in vitro (например, линию токсин-чувствительных клеток). Если функциональная система in vitro недоступна, стратегия испытания in vitro может быть основана на последовательном определении (измерении) более одного параметра, где это необходимо, так, чтобы они отражали способ воздействия рассматриваемых токсичных компонентов. Например, использование испытаний на основе иммунологических и биохимических методов для определения связывания рецептора и (или) активности фермента. В большинстве случаев, когда необходимо заменить испытание in vivo, будут доступны данные о чувствительности этой модели для обнаружения рассматриваемого токсина. Новые методы in vitro могут быть охарактеризованы с использованием метода добавок и использованием архивных сведений об испытаниях in vivo для подтверждения их достаточной чувствительности. Такие испытания в сочетании с соответствующими временными и температурными условиями также могут быть использованы для подтверждения отсутствия реверсии специфического токсина.

Метод массового параллельного секвенирования молекулы взамен испытания на нейровирулентность

Существующее испытание на нейровирулентность in vivo может быть заменено генотипическим методом оценки нуклеотидной или аминокислотной последовательности вирусной вакцины in vitro. Для любого метода генотипирования in vitro необходимы глубокие знания о молекулярных маркерах, ответственных за ослабление живой вирусной вакцины (например, пероральная вакцина для профилактики полиомиелита живая). И тогда для мониторинга соответствия серий вакцины можно использовать определение наличия требуемых маркеров молекулярной аттенуации и процентного содержания мутантов с помощью таких методов, как массовое параллельное секвенирование.

Новые методы молекулярной биологии для обнаружения посторонних вирусных агентов

Обнаружение посторонних вирусных агентов в банках клеток, посевном материале (посевной культуре вируса), биомассе вируса в настоящее время проводят с использованием ряда методов in vivo и in vitro на разных этапах производственного процесса. Доступны новые чувствительные методы молекулярной биологии с широкими возможностями обнаружения, в том числе: методы массового параллельного секвенирования или высокопроизводительного секвенирования, полимеразная цепная реакция с вырожденными праймерами для семейств вирусов или методы случайного праймирования (связанные или не связанные с секвенированием), гибридизация с множеством олигонуклеотидов, масс-спектрометрия. Использование этих новых методов молекулярной биологии позволило установить пробелы в существующей стратегии испытаний, так как были выявлены ранее необнаруживаемые вирусные контаминанты в готовом нерасфасованном продукте, банках клеток, из которых он был произведен, и на промежуточных стадиях производства. Новые методы молекулярной биологии (например, массовое параллельное секвенирование или высокопроизводительное секвенирование) обнаруживают геномы вирусов, в то время как существующие методы in vivo основаны на наблюдениях за эффектами вирусов на экспериментальных животных. При замене методов in vivo новыми методами молекулярной биологии необходимо сравнение специфичности и чувствительности новых и существующих методов. Для этого создают соответствующую группу репрезентативных хорошо охарактеризованных модельных вирусов для оценки способности нового метода обнаруживать вирусы, которые обнаруживаются (или не обнаруживаются) методами in vivo, и для определения того, что их чувствительность не хуже чувствительности методов in vivo. Этот последний аспект является особенно сложным, так как новые методы молекулярной биологии обнаруживают характеристики вирусного контаминанта, отличные от обнаруживаемых методом in vivo (геном для методов молекулярной биологии по сравнению с инфекционным вирусом для методов in vivo), а также отсутствуют данные по валидации для методов in vivo или имеются в ограниченном объеме. Результат новых методов молекулярной биологии не является окончательным, так как обнаружение генома или фрагментов генома не обязательно указывает на присутствие инфекционного вируса.

203020000-2019