2.5. МАКСИМАЛЬНО ДОПУСТИМОЕ РАЗВЕДЕНИЕ

В данном разделе рассматривают вопросы: какое разведение субстанции для фармацевтического применения или лекарственного препарата следует использовать в испытании для получения подтверждения, что при отрицательном результате содержание эндотоксинов в испытуемом образце меньше предельного содержания эндотоксинов, а при положительном результате равно или превышает допустимое предельное содержание.

Максимально допустимое разведение (МДР) представляет собой наибольшее разведение испытуемого образца, при котором может быть определено предельно допустимое содержание эндотоксинов. Оно зависит от предельного содержания эндотоксинов и чувствительности лизата амебоцитов (предела обнаружения). МДР рассчитывают по формуле:

где: ПСЭ - предельное содержание эндотоксинов;

C - концентрация испытуемого раствора;

- чувствительность лизата амебоцитов в международных единицах в миллилитре.

Концентрацию испытуемого раствора выражают в единицах:

- мг/мл, если предельное содержание эндотоксинов указано в массовых единицах (МЕ/мг);

- ЕД/мл, если предельное содержание эндотоксинов указано в пересчете на единицу биологической активности (МЕ/ЕД);

- мл/мл, если предельное содержание эндотоксинов указано в объемных единицах (МЕ/мл).

Предел обнаружения () представляет собой чувствительность лизата в гель-тромб методе (МЕ/мл), заявленную производителем лизата амебоцитов, или самую низкую концентрацию эндотоксинов, определенную по стандартной калибровочной кривой в турбидиметрическом или хромогенном методах. Если значение МДР не является целым числом, для рутинных испытаний можно использовать подходящее целое число, меньшее, чем МДР (приготовление раствора испытуемого образца в меньшем разведении, чем МДР). В таком случае, отрицательный результат означает, что содержание бактериальных эндотоксинов ниже допустимого предельного содержания. Если содержание бактериальных эндотоксинов в испытуемом образце ниже допустимого предельного содержания эндотоксинов, но достаточно велико, чтобы вызвать гелеобразование лизатом амебоцитов, то испытание в таких условиях может быть положительным. Следовательно, когда в испытании с использованием "рабочего" разведения, кратность которого меньше МДР, получен положительный результат, испытуемый образец разводят до МДР и повторяют испытание. В любом сомнительном или спорном случае необходимо использовать МДР. Данный факт подчеркивает важность подтверждения чувствительности лизата амебоцитов.

Пример

Необходимо провести испытание раствора 50 мг/мл натрия фенитоина (для внутривенного введения). Определяют МДР, используя следующие данные:

M - максимальная доза для человека 15 мг/кг;

C - концентрация испытуемого раствора 50 мг/мл;

K - предельная пирогенная доза эндотоксинов 5 МЕ/кг;

- предел обнаружения 0,4 МЕ/мл.

Для рутинных испытаний данного лекарственного препарата 1 мл испытуемого раствора разводят до 20 мл (МДР/2 округляют до ближайшего меньшего целого числа). В случае, если результат испытания будет положительным, то 1 мл испытуемого раствора следует развести до 41,67 мл и повторить испытание. Разведение до 41,67 мл также необходимо, когда испытание проводят в спорных случаях.