3. ОБЩАЯ ПРОЦЕДУРА

Испытуемый раствор инкубируют с источником моноцитов человека или с линией моноцитарных клеток человека. Источником моноцитов человека могут быть: гепаринизированная периферическая кровь человека, отобранная не более чем за 4 ч до испытания; моноцитсодержащая фракция крови, например, мононуклеарные клетки периферической крови человека, выделенные центрифугированием в градиенте плотности.

Гепаринизированную периферическую кровь человека обычно разводят культуральной средой или физиологическим раствором, например, до концентрации от 2% до 50% (об/об). Мононуклеарные клетки периферической крови человека или линии моноцитарных клеток в культуральной среде с добавлением плазмы донора или сыворотки AB (IV группа крови) обычно используют при окончательной плотности клеток 0,1 - 1,0 x 10⁶ клеток на лунку, пробирку или другую емкость. При использовании линий моноцитарных клеток сыворотку AB можно заменить на фетальную бычью сыворотку, инактивированную нагреванием.

Культура клеток готовится при температуре (37 1) °C в подходящей атмосфере для культуральной среды, например, увлажненном воздухе с 5% CO₂. Продолжительность культивирования должна быть достаточной для накопления маркеров пирогена. Реакцию выбранного маркера, например, провоспалительного цитокина, сравнивают с реакциями на стандартный образец эндотоксина или контрольную серию испытуемого препарата.