5-1. РОСТОВЫЕ СВОЙСТВА ПИТАТЕЛЬНЫХ СРЕД

5-1-1. Приготовление рабочей взвеси тест-микроорганизмов. Культуры бактерий и грибов C. albicans смывают с поверхности скошенного агара стерильным 0,9% раствором натрия хлорида. Готовят стандартные взвеси каждого тест-штамма, соответствующие 10 МЕ по стандартному образцу мутности. Для культур B. subtilis, B. cereus и C. albicans - это концентрация 10⁷ КОЕ/мл, для E. coli, S. abony, P. aeruginosa, S. aureus - 10⁹ КОЕ/мл. Стандартизованные взвеси методом последующих десятикратных разведений доводят стерильным 0,9% раствором натрия хлорида до концентрации 10³ КОЕ/мл. Для определения фактической концентрации рабочих взвесей бактерий и C. albicans культуры высевают поверхностным методом из концентрации 10³ КОЕ/мл по 0,1 мл на чашку Петри с соответствующей аттестованной агаризованной средой.

Для смыва конидий A. brasiliensis с агара Сабуро с глюкозой используют стерильный 0,9% раствор натрия хлорида, содержащий 0,05% полисорбата-80. Количество конидий в 1 мл взвеси определяют с помощью камеры Горяева или посевом подходящего разведения на аттестованный агар Сабуро с глюкозой или среду N 2.

Для посева готовят рабочую взвесь A. brasiliensis с концентрацией конидий около 0,5·10³ в 1 мл, которую высевают поверхностным методом по 0,1 мл на чашки с агаром Сабуро с глюкозой (или средой N 2).

Приготовленные рабочие взвеси тест-микроорганизмов используют для определения ростовых свойств питательных сред. Количество клеток тест-штаммов для внесения в жидкую или агаризованную питательные среды не должно превышать 10² КОЕ.

5-1-2. Испытание агаризованных сред. Испытуемую и аттестованную агаризованные среды разливают в чашки Петри диаметром 90 мм по 15 - 20 мл, подсушивая агар после застывания. По 0,1 мл рабочей взвеси тест-микроорганизма с концентрацией 10³ КОЕ/мл засевают поверхностным методом на чашки Петри с испытуемой и аттестованной средами в двойной повторности.

На агаризованнных средах после инкубации подсчитывают колонии тест-штаммов микроорганизмов и определяют коэффициент прорастания К_пр по формуле:

,

где: N - среднее арифметическое числа колоний на чашке Петри с испытуемой средой;

N_o - среднее арифметическое числа колоний на чашке Петри с аттестованной средой.

5-1-3. Испытание жидких сред. Жидкие испытуемые и аттестованные питательные среды разливают в стерильные пробирки размером 15 x 150 мм по 10 мл. По 0,1 мл рабочей взвеси тест-штамма микроорганизма с концентрацией 10³ КОЕ/мл засевают в пробирки с испытуемой и стандартной средой (по 3 пробирки для каждого вида среды). Инкубируют при соответствующей температуре в течение минимального для этого теста времени. Рост микроорганизмов определяют визуально.

5-1-4. Требование к ростовым свойствам питательных сред. Испытуемая агаризованная среда считается годной к использованию, если коэффициент прорастания составляет от 0,5 до 2 при сравнении с аттестованной питательной средой.

Испытуемая жидкая среда считается годной к использованию, если на испытуемой и аттестованных средах наблюдают визуально одинаковый рост тест-штамма.