Отделение стериновой фракции (ЖХ)

Отделение стериновой фракции проводят методом жидкостной хроматографии. (2.1.2.28).

Испытуемый раствор. Высушенный остаток неомыляемых веществ переносят тремя порциями по 4 мл растворителя, используемого при получении неомыляемых веществ (обычно эфир P или петролейный эфир P), в пробирку вместимостью 15 мл, упаривают досуха в токе азота P. Остаток растворяют в объеме подвижной фазы, достаточном для получения концентрации около 40 мг/мл, прибавляют несколько капель 2-пропанола P1 для улучшения растворимости (обычно достаточно трех капель для обеспечения полного растворения). Полученный раствор пропускают через мембранный фильтр с размером пор 0,45 мкм.

Раствор сравнения. Готовят из неомыляемых веществ, полученных из подсолнечного масла P в соответствии с указаниями для испытуемого раствора.

Условия хроматографирования:

- предколонка: из нержавеющей стали длиной 0.005 м и внутренним диаметром 4,6 мм, покрытая слоем силикагеля для хроматографии P сферическим размером частиц 5 мкм и размером пор 6 нм;

- колонка: из нержавеющей стали длиной 0.25 м и внутренним диаметром 4,6 мм, покрытая слоем силикагеля для хроматографии P сферическим с размером частиц 5 мкм и размером пор 6 нм;

- подвижная фаза: 2-пропанол P1 - гексан P (1:99, об/об);

- скорость подвижной фазы: 1,0 мл/мин;

- детектор: ультрафиолетовой, длина волны 210 нм;

- объем вводимой пробы: по 50 мкл испытуемого раствора и раствора сравнения.

Идентификация пиков стеринов (раствор сравнения): обнаруживаются два основных пика, элюирующимися примерно между 23 мин и 32 мин. Пики фракции стеринов элюируются в конце хроматограммы.

Фракцию собирают на выходе детектора в пробирку с винтовой крышкой вместимостью 15 мл. Растворитель упаривают в токе азота P.