4. ЭЛЕКТРОФОРЕЗ НА КОЛОНКАХ С ПОЛИАКРИЛАМИДНЫМ ГЕЛЕМ

При электрофорезе на колонках с полиакриламидным гелем стационарной фазой является гель, приготовленный из смеси акриламида и N,N'-метиленбисакриламида. Колонки с гелем готовят с использованием трубок длиной 7,5 см и внутренним диаметром 0,5 см, во всех трубках должен быть использован один и тот же раствор.

Прибор. Прибор состоит из двух вставленных вертикально один над одним резервуаров для буферного раствора, изготовленных из подходящего материала, например, поли(метилметакрилата). Каждый резервуар снабжен платиновым электродом. Электроды присоединены к источнику тока, что позволяет проводить испытание либо при постоянном токе, либо при постоянном напряжении. В основании верхнего резервуара имеется ряд держателей, равноудаленных от электрода.

Методика. Обычно растворы дегазируют до начала полимеризации, гели используют сразу после приготовления. Готовят предписанную смесь компонентов, заливают ее в соответствующие закрытые снизу стеклянные трубки до одинакового уровня, не достигая около 1 см от верхнего края, избегая попадания пузырьков воздуха в трубки. На смесь наслаивают слой воды P, чтобы исключить контакт с воздухом, и оставляют для полимеризации. Гелеобразование обычно занимает около 30 минут и завершается, когда образуется граница, четко разделяющая поверхности геля от слоя воды. Водный слой удаляют. Нижний резервуар наполняют предписанным буферным раствором. Стеклянные трубки открывают (снимают колпачки с нижнего конца) и вставляют в держатели верхнего резервуара так, чтобы дно трубок было погружено в буферный раствор нижнего резервуара. Колонки осторожно наполняют предписанным буферным раствором. Готовят испытуемые и контрольные образцы, содержащие предписанный индикаторный краситель, и уплотняют путем растворения в них, например, сахарозы P.

Приготовленные образцы наслаивают на поверхность геля, используя для каждого образца отдельную трубку. Верхний резервуар наполняют тем же буферным раствором. Электроды подключают к источнику тока и проводят процесс электрофореза при заданной температуре и с использованием заданного постоянного напряжения или тока.

Источник тока отключают, когда индикаторный краситель почти переходит в нижний резервуар. Каждую трубку сразу вынимают из прибора и путем выдавливания извлекают гель. Определяют, как предписано, местоположение полос на электрофореграмме.